第9章经典液相色谱法.pptx

经典液相色谱; 经典液相色谱法包括经典柱色谱法和平面色谱法，是在常压下靠重力或毛细作用输送流动相的色谱方法。 经典色谱法与现代色谱法的区别主要在于输送流动相方式、固定相种类和规格、分离效能、分析速度和检测灵敏度等方面。 经典液相色谱法设备简单，操作方便，分析速度快。 在药物研究、食品化学、环境化学、临床化学、法检分析及化学化工等领域都有广泛的应用。特别是在天然药物成分的鉴别、分离等方面发挥着独特的作用，是中药鉴别的主要方法之一。; 第1节 液-固吸附柱色谱法（LSC） 经典的液—固吸附色谱（liquid solid adsorption chromatography，LSC）是以吸附剂为固定相，有机溶剂为流动相，利用不同组分在吸附剂上吸附力的差异，进行分离分析的方法。 用于分离分析极性至弱极性的化合物，不适用于分离分析强极性的物质。;一、基本原理 1．吸附与吸附平衡 吸附是指溶质分子与吸附剂分子之间所存在的某些化学作用力而被吸附在吸附剂的表面。 吸附过程则是试样中溶质分子（X）与流动相分子（Y）争夺吸附剂表面活性中心的过程，即为竞争吸附过程（图10-1）。;吸附平衡常数: 由于流动相分子是大量的,所以[Ym]/ [Ya ]可视为常数。 ;2吸附等温线 一定温度与压力下,当吸附达到平衡时，某组分在固定相中的浓度与在流动相中的浓度,随物质总量的变化而变化的关系曲线。 ;（2）凸形吸附等温线 在绝大多数情况下，吸附等温线都有些弯曲而呈现凸形吸附等温线。其中主要原因之一是固体吸附剂表面的不均一性。 例如硅胶表面上有几种吸附能力不同的吸附中心——强的、较强的、弱的、极弱的 同一溶质分子总是先占据强的吸附中心，两者之间作用力强，溶质分子被吸附得牢，吸附平衡常数K值大，迁移速率慢；后占据弱的吸附中心，两者之间作用力弱，吸附平衡常数K值小，迁移速率快，并依此类推。 显然，同一溶质分子具有不同的吸附平衡常数K，即具有不同的迁移速率。在溶质分子集中的区域，吸附剂的所有吸附中心达到吸附饱和，K值小，迁移速率快???先流出色谱柱；在溶质分子稀少的区域，由于仅仅占据了强吸附中心，K值大，迁移速率慢，后流出色谱柱。从而导致流出曲线前沿陡峭，后沿拖尾，形成拖尾峰，且保留时间亦随样品量的增加而减小。如图10-2B所示。;（3）凹形：由于进样量较大，影响了固定相的物理性质。随溶质量的增加, Cs/Cm增加，所以呈凹形。;拖尾峰的出现对以下产生了不利的影响： ①利用峰面积进行定量时峰面积的积分精度和重现性。 ②利用峰高定量时检测的灵敏度。 ③定性分析时保留值与物质性质的相关性。 ④组分之间相互分离的程度。 因此应尽量避免色谱峰的拖尾。 克服的方法是：减小进样量或样品的浓度，即利用凸形吸附等温线的直线部分，从而得到左右对称的流出曲线。;二、 吸附剂 对吸附剂的要求： (1)表面积大，具有一定的吸附能力。 (2)不应与流动相发生化学反应。 (3)粒度要细，一般要150目。;吸附剂： 常用的有：氧化铝、聚酰胺、硅胶等。; 三种存在形式: 吸附能力 ：Ⅲ >Ⅰ>Ⅱ 活性大小 ：Ⅲ >Ⅰ>Ⅱ ;(3) 聚酰胺:由酰胺聚合而成的高分子物质。 其吸附原理利用分子内酰胺基和羰基。 酰胺基中的羰基与酚类、黄酮类、酚类中的羟基或羧基形成氢键； 酰胺基中的氨基与醌类、硝基类中的硝基形成氢键而产生吸附作用。不同的化合物，由于活性基团的种类、数目与位置的不同，形成氢键的能力不同，而实现分离。 对位间位取代基均能形成氢键的,吸附力增大。邻位基团间能形成分子内氢键的,吸附力减小。芳香核具有较多共轭键时,吸附力增大。;（4）大孔吸附树脂 大孔吸附树脂是一种不含交换基团，具有大孔网状结构的高分子吸附剂。粒度多为20-60目。理化性质稳定，不溶于酸、碱及有机溶剂。大孔树脂可分为非极性和中等极性两类，在水溶液中吸附力较强且有良好的吸附选择性，而在有机溶剂中吸附能力较弱。 大孔吸附树脂主要用于水溶性化合物的分离纯化，近年来多用于皂苷及其它苷类化合物与水溶性杂质的分离。也可间接用于水溶液的浓缩，从水溶液中吸附有效成分。 ;硅胶含水量（%）; 活度级数 含水量 活性