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医学免疫学实验指导：凝集反应 内容： 四、直接凝集反应 玻片凝集反应—细菌的鉴定、ABO血型鉴定 试管凝集反应 五、间接凝集反应 正向间接凝集反应—间接凝集乳胶试验、间接血凝试验 反向间接凝集反应—反向间接血凝试验、协同凝集试验 间接凝集抑制试验 试验 、直接凝集反应 （Direct agglutination reaction） 细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下直接与相应的抗体结合形成肉眼可见的凝集块，称为直接凝集反应。常用的直接凝集试验有玻片法和试管法两种。 ㈠ 玻片凝集反应（Slide agglutination test） 玻片凝集反应是将已知的抗体直接与未知的颗粒性抗原物质（如细菌，红细胞等）在玻片上混合，在有适当的电解质存在的条件下，如两者对应便发生特异性结合，形成肉眼可见凝集物，即为阳性；如两者不对应，便无凝集物出现，即为阴性。此法属定性试验，主要用于细菌鉴定和分型、人类红细胞ABO血型的鉴定等。 细菌的鉴定： 【材料】 ⑴ 1∶20稀释的伤寒杆菌的诊断血清。 ⑵ 伤寒杆菌、大肠杆菌18~24小时培养物、生理盐水。 ⑶ 洁净载玻片、接种环、酒精灯、记号笔等。 【方法】 ⑴ 取洁净载玻片一张，用记号笔划分为三格，并依次编号为1、2、3。 ⑵ 用灭菌的接种环取生理盐水于玻片的三格内，各加2~3环。 ⑶ 将接种环在酒精灯火焰上烧灼灭菌，冷却后自平皿挑取少量大肠杆菌置于第2格生理盐水中混匀。然后，同法分别取少许伤寒杆菌于第1格及第3格，与生理盐水混匀。 ⑷ 用灭菌接种环于第2格加伤寒杆菌诊断血清2~3环并混匀，同法取伤寒杆菌诊断血清2~3环，加于第1格中混匀。 ⑸ 轻摇玻片，静置1~2分钟后，观察结果， 【结果】 如上述混合悬液由均匀混浊状变为澄清透明，并出现大小不等的乳白色凝集块者为阳性；如混合物仍呈均匀混浊，无凝集物者为阴性。 【注意事项】 ⑴ 每一待检菌均须作生理盐水对照，如对照凝集则表示细菌发生自凝，试验无效。 ⑵ 取细菌培养物时，不宜过多。与诊断血清或生理盐水混合时，必须将细菌涂散，涂均匀，但不宜涂得太宽，以免很快干涸而影响结果。 ⑶ 伤寒杆菌为肠道致病菌，在实验中务必严格无菌操作，遵守实验规则，用后的载玻片应立即放入盛有消毒剂的容器内。 ⒉　ABO血型鉴定 【材料】 ⑴ 抗A标准血清、抗B标准血清。 ⑵ 载玻片、采血针、碘酒和酒精棉球、牙签、生理盐水、毛细吸管等。 【方法】 ⑴ 取洁净载玻片一张，用记号笔分为两格，于上角分别注明A、B字样。 ⑵ 用毛细吸管取生理盐水于玻片的两格内各加一滴。 ⑶ 用碘酒酒精棉球消毒耳垂或手指尖，采血1~2滴混入玻片上的生理盐水中，迅速用牙签混匀，制成血球悬液。 ⑷　在两格血球悬液中分别加抗A标准血清和抗B标准血清一滴，分别用牙签两端搅拌混匀，2~5分钟后摇晃玻片，观察结果。 ？ 【结果】 混合液由均匀红色混浊状逐渐变为透明，并出现大小不等的红色凝集块者即为红细胞凝集；若混合液仍呈均匀混浊状，无凝集块，则表明红细胞未发生凝集。血型鉴定试验结果及鉴定见表 表 血型鉴定试验结果判定 诊断血清 血型 抗A 抗B A ＋ － B － ＋ A B ＋ ＋ O － － “＋”表示凝集 “－”表示不凝集 【注意事项】 ⑴ 试验用载玻片要清洁，并务必注明A和B字样。 ⑵ 待检红细胞悬液不宜过稀或过浓。 ⑶ 要及时观察结果，以防时间过长使标本干涸而影响结果的观察和判定。 ㈡试管凝集试验 本试验是用已知的颗粒性抗原来检测未知的抗体及其相对含量，此法属定量试验。方法是用生理盐水将待测血清在试管中进行连续倍比稀释，然后于各管中加入等量的已知抗原悬液，经过一定时间后，观察有无凝集并根据凝集程度判定血清抗体的效价。 【