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精品 玻璃微电极技术及其在植物胞内测量中的应用 姓名：汪晓丽 学号： 4034 导师：封克 教授 扬州大学环境科学与工程学院，扬州 225009 玻璃微电极技术简介 1.1 玻璃微电极及离子选择性玻璃微电极 微电极是指尖端很细的电极探针。它可以用于胞内测量 [1~8] ，也可以用于胞外测量 。对于细胞内测量，通常采用玻璃微电极，内部灌注盐溶液，与电极夹持器的金属接触点之间构成盐桥，从而构成电路的一部分。玻璃微电极尖端用特制仪器拉制得非常细（直径一般不超过 1 μ m），这样细的针尖刺入植物细胞膜后，质膜很快就能够在针尖刺入处愈合，从而避免细胞膜受到破坏，且容易获得一个比较稳定的膜电势差。 最简单的玻璃微电极可用来测量细胞膜内外的电势差。这时需要两个电极，一个是测量电极，尖端细小，插入细胞内，另一个是参比电极，尖端稍大，安放在细胞外。两 电极间的电势差由静电计测量，经放大器放大后由记录仪记录（图1）。 图 1 玻璃微电极测定细胞膜电位示意图 图 2 双管离子选择性玻璃微电极示意图 ( from Miller A J. ) - 可编辑 - 精品 离子选择性玻璃微电极是指在尖端有一层离子选择性液膜的玻璃微电极。 它对跨膜 电势差和相应的敏感离子都有响应。胞内测量时，可同时测量跨膜电势差和相应离子的 活度（图 2 ）。采用离子选择性微电极进行胞内测量时主要的优点是： （1 ）原位测定， 不会对细胞造成伤害；（2 ）可同时测定单个细胞的跨膜电势梯度和化学势梯度； （3 ）可 用于测定多种离子；（ 4）与其它胞内测量方法相比，相对比较便宜。正是由于离子选择 性微电极的这些优点，使得离子选择性电极成为测量单个细胞内离子的活度的唯一方 法。采用离子选择性微电极进行胞内测量时最大的缺点是：只能测量细胞内单点的离子 活度，因而在细胞内离子浓度相差很大时不能提供更为完全的信息。 1.2 离子选择性玻璃微电极技术 离子选择性玻璃微电极的制作是微电极技术的一个关键步骤， 大体可分为拉制玻璃 针、硅化玻璃管内壁、灌注离子选择性液膜、校正等几个步骤 [10] 。玻璃微电极通常采用 硬质玻璃（如硼硅玻璃、铝硅玻璃）管经专门的微电极拉制仪拉制而成。硅化玻璃管内 壁是为了在玻璃管内壁与离子选择性液膜之间形成高阻封接的牢固防水层。 离子选择性 液膜原液可以自己配制或直接购买商品化的， 灌注到微电极的尖端后形成一层对于特定 敏感离子有响应的选择性液膜。 校正离子选择性玻璃微电极时通常采用具有不同活度的 一系列标准溶液。为了尽量接近细胞内的情况，需要对标准溶液的离子强度、 pH 等进 行调节，并且其中往往还要加入少量的干扰离子。 玻璃微电极制作成功后，即可用于进行植物细胞的胞内测量。所采用的仪器设备主 要有：显微镜、微操纵仪、放大器、数据采集系统、防震台和屏蔽罩等。由于生物电信 号的电压极小， 电阻大，所以放大器必须具备高灵敏度、 高输入阻抗、 高辨差率等特点， - 可编辑 - 精品 才能准确记录到电信号的微弱变化。 玻璃微电极技术在植物细胞胞内测量中的应用 2.1 研究离子跨膜转运机制 细胞的膜电位是由细胞膜对特异离子的相对透性和离子的跨膜浓度梯度决定的， 一 般为负值。任何离子或分子在跨膜转运时，如果有电荷的移动，就会使跨膜电势差（膜 电位）发生变化。当内向电流（阳离子内流或阴离子外流）大于外向电流（阳离子外流 或阴离子内流）时，膜被去极化，即膜电位向负值减少的方向变化；当外向电流大于内 向电流时，膜被超极化，即膜电位向膜电位负值增大的方向变化。当然，生物膜中膜电 位的变动是很有限的，因为：①膜电位为负值，使得一些溶质（例如： NH 4 + 、糖类、 氨基酸等）能够逆浓度梯度在电场驱动下进行跨膜运输；②膜电位需控制在一定范围内 才能使得 H + -ATP 酶能够正常地运转，否则会造成膜的电损伤；③膜电位在细胞信号传 导中起着重要的作用，例如，当一些效应物引起膜电位去极化时，触发 Ca2+ 通道的激 活，使得胞内的 Ca2+ 浓度发生变化而导致信号进一步传导 [11] 。膜电位高低受到细胞外 和细胞内诸多因子的影响，例如 pH 、细胞质 ATP 浓度、离子组成等。膜电位可用于表 征细胞健康状况和能量状况，因为一旦细胞膜受到损伤，或者细胞内的 ATP 库被耗竭 了，膜电位就会有大幅度的改变 [12] 。 由于离子选择性电极可同时测量跨细胞膜的电势差和膜内特定离子的活度， 因而可 根据 Nernst 方程来计算特定离子跨膜运输的平衡浓度，并判断其是主动运输还是被动 运输。假如测得液泡膜电势差为 10~20mV ，利用 Nernst 方程可计算出通过被动运输 进入液泡膜的 NO 3-平衡浓度可达 6~9 mol L -1 。但是，实际上液泡中的 NO 3-浓度要高