老鼠实验方案.pdfVIP

槲皮素肺、心含量的测定 1. 药动物学试验 实验鼠（ 150g~200g，265 ±？？g 表达准确些 ）给药前禁食 12h，自由饮水。 用 0.5%的羧甲基纤维素钠溶液分别将橙皮素和甘草次酸制成悬浮液， 高浓度 （溶 -1 液组成：槲皮素 +0.5%羧甲基纤维素钠）灌胃给药（橙皮素） 20mg.kg ，低浓度 （溶 液 组 成 ： 槲 皮 素 +0.5% 羧 甲 基 纤 维 素 钠 + 甘 草 次 酸 ） 灌 胃 给 药 槲 皮 -1 素 )10mg.kg 。空白对照组实验鼠灌胃 0.5%羧甲基纤维素钠。 将实验鼠按三雄三雌随机分组，每组共 6 只。按要求给药，根据分布相、平 衡相、消除相分别在给药后 1.5 小时、 3 小时、 4 小时、空白组为灌药后 1 小时 宰杀实验鼠，迅速取出肺、心组织，用生理盐水冲洗，置于冻存管中（放置分别 是 1 雌、 1 雄、2 雌、 2 雄共 4 支离心管），于冰箱中冷冻保存。 2.溶液的配制 槲皮素储备液： 精密称取橙皮素 25mg，置于 50ml 容量瓶中， 加甲醇溶解并 -1 定容，制得 500ug.ml 的橙皮素贮备液，使用时用甲醇稀释至所需浓度。 -1 橙 皮 素 内 标 液 ： 配 制 橙 皮 素 浓 度 为 0.2mg.ml 溶 液 50ml ， 即 0.2 mg.ml-1*50ml=10mg ，槲皮素百分含量 97%，则将 M 槲皮素 =10mg/ 97%=0.0103g溶 解于甲醇中配制成浓度为 0.2mg.ml-1 的橙皮素内标液 . 3. 组织样品的处理 从冰箱中取出肺、心组织样，解冻，将组织先剪成几大片，剔除组织周围 其他杂质成分如血块等，再剪碎，滤纸吸干。 -1 ▲分别称取组织 0.2g，按 2.5ml.g 组织加入生理盐水（ 0.5ml ）、20ul 内标液 （橙皮素浓度为 0.5mg.ml-1 ）制成组织匀浆液。在组织匀浆液中再加入甲醇 600ul， 涡旋 60s，3500 （可以转数更高，建议最好 10000，以节约时间，和充分沉淀） 转每分钟，离心 15min，定量吸取上清液 800ul （尽可能吸多，但所有过程要求 取出体积一致），50 摄氏度氮气流下吹干（即已预处理过的组织干样） 冰箱冷藏 备用。 ●测定时将上述干品用 HLPC 流动相（ 100ul，用甲醇 ）再次溶解，涡旋 60s （或用移液枪混合均匀），10000 转/ 分钟离心 3-5min ，取上清液 20ul 进样。 3. 测定方法、条件 (1)色谱条件 (该条件要试验，保证内标与待测物峰充分分离，峰形好 ) CTO-20A 色谱仪，流动相流动相：甲醇：磷酸（ 45:55）；检测波长 373nm； -1 流速 1.0ml.min ；柱温 35 摄氏度；进样量 20ul 。 （2 ）方法专属性 （看色谱图有没有干扰测试情况） 空白(灌服 0.5%羧甲基纤维素钠 )实验鼠组织样液； 空白 ( 灌服 0.5%羧甲基纤维素钠 )