免疫学单克隆抗体及技术.pptxVIP

单克隆抗体及其免疫学技术Company Logo多克隆抗体单克隆抗体基因工程抗体 三代抗体简介基因水平细胞水平整体水平Company Logo 用包含多种抗原决定基的抗原免疫动物，剌激多个B细胞克隆，即能产生针对多种抗原决定基的不同抗体的混合物，称为多克隆抗体。 由一个B细胞克隆产生的只识别一种抗原决定基的同源抗体，称单克隆抗体（McAb）。 monoclonal antibody Company Logo B细胞识别相应抗原决定基活化增殖分化细胞克隆产生相应抗体多克隆抗体的产生机理Company Logo血清（serum）：血液或血浆凝固后，析出的黄色液体称为血清。抗原免疫后的动物血清中含有大量能与相应抗原结合的抗体分子，称为抗血清（antiserum，多克隆抗体）抗蛇毒血清---免疫治疗狂犬病抗毒血清---免疫治疗免疫治疗：抗体,被动免疫治疗自动免疫：预防感染； 被动免疫：应急治疗Company Logo静脉丙种球蛋白( intravenous immune globulin )川崎病又称皮肤黏膜淋巴结综合征（MCLS），是一种以全身血管炎变为主要病理的急性发热性出疹性小儿疾病。日本川崎富于1967年首先报道，其发病率逐年增高，是儿童后天性心脏病的首要病因治疗川崎病，预防冠状动脉瘤 可能的作用为:①大剂量IVIG对免疫的负反馈调节,使CD8+细胞增多,被活化的CD4+细胞减少,从而减少IgG的合成。②封闭血小板表面的Fc受体,阻止血小板黏附、聚集,预防血栓。③封闭血管内皮细胞的Fc受体,从而阻断免疫炎症反应,防止冠脉损害。④可能通过某种特异性抗体作用于一些目前尚不清楚的致病菌或毒素等外源性抗原。⑤抑制血小板源生长因子。Company Logo多克隆抗体的制备一般包括以下几个步骤：1、制备抗原。2、选择实验动物。3、动物免疫。4、试取血进行测试，看看是否成功免疫。5、如果成功免疫，杀死实验动物，采集全部血清。6、纯化出抗体。7、鉴定抗体。包括纯度以及特异性。Company Logo抗原克隆A多克隆抗体表位A表位B克隆B表位C克隆C单克隆抗体第一节 单克隆抗体技术（杂交瘤技术）杂交瘤技术的基本原理 通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。 两种细胞分别是经抗原免疫的小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞。被特异性抗原免疫的小鼠脾细胞（B淋巴细胞）的主要特征是它的抗体分泌功能，但不能在体外连续培养，小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖，即具有所谓永生性。在选择培养基的作用下，只有B细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交细胞才能具有持续培养的能力，形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞克隆。 杂交瘤技术的建立 1975年Koehlert和Milstein利用杂交瘤技术，使以绵羊红细胞（SRBC）免疫后小鼠的B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞（SP2/0或NS-1）融合，建立了能定向产生SRBC单克隆抗体的杂交细胞株，这一杂交细胞株具有B淋巴细胞产生特异性抗体的能力，又具有肿瘤细胞在体外无限增殖的特点，因此可以不断地从细胞培养上清液中获得单克隆抗体。单克隆抗体的问世被誉为免疫学中的一次革命，它对生物学、医学各领域产生了巨大的影响。获1984年诺贝尔医学与生理学奖。单克隆抗体的应用前景：1、医学检验诊断试剂：广泛应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、免疫组化和流式细胞仪等技术，并且单克隆抗体的应用很大程度上促进了商品化试剂盒的发展。 ①病原微生物抗原、抗体的检测；②肿瘤特异性抗原和肿瘤相关抗原的检测 ；③免疫细胞及其亚群的检测；④机体微量成分的测定；⑤细胞因子的测定。2、亲和层析的配体：将单克隆抗体吸附在一个惰性的固相基质(如Separose 2B、4B、6B等)上，并制备成层析柱。当样品流经层析柱时，待分离的抗原可与固相的单克隆抗体发生特异性结合，其余成分不能与之结合。将层析柱充分洗脱后，改变洗脱液的离子强度或pH，欲分离的抗原与抗体解离，收集洗脱液便可得到欲纯化的抗原。 3、作为生物治疗的导向武器 将化疗药物、细菌毒素、植物毒素或放射性同位素等细胞毒剂与抗肿瘤抗原的单克隆抗体直接交联，利用其导向作用，使细胞毒剂定位于肿瘤细胞把它直接杀伤。这不仅提高了抗体的疗效，也可降低细胞毒剂对正常细胞的毒性反应。目前还存在不少技术难关，包括人体对鼠源单抗的排异问题等。4、单克隆抗体药物 抗体药物主要应用于肿瘤导向治疗、自身免疫性疾病（包括类风湿性关节炎、强直、银屑病等）、抗排斥治疗、肿瘤诊断单克隆抗体的制备原理单克隆抗体的制备过程：B淋巴细胞骨髓瘤细胞饲养细胞杂交瘤的克隆及冻存细胞融合抗体筛选选择性培养Company Logo1.B淋巴细胞的制备B淋巴细胞：接受抗原刺激后，能分泌针对该抗原的特异性抗 体，在体液免疫中具有重要功能。——短