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第三章 动物细胞工程制药本章重点：动物细胞的生理特点； 生产用动物细胞的要求和获取方法； 动物细胞培养基的种类及各种培养基的特 点； 细胞计数的方法； 动物细胞大规模培养的方法； 难点：动物细胞生物反应器的类型及结构特点第一节 概述细胞工程发展史（了解） 1838—1839年提出细胞学说；1885 年用生理盐水培养鸡胚组织，使之存活1897年证明从血液和结蒂组织中分离得到细胞可以在血清和血浆中存活1903年观察懂蝾螈细胞的分裂1907年无菌条件下培养离体的蛙胚神经组织90多年以来细胞培养工作已取得巨大的进展，尽管它还很年轻，但是已成为当今高科技——生物工程研究领域不可缺少的一部分，已在国民经济的许多部门，包括制药工业中发挥了巨大的作用。 第一节 概述1 细胞工程的定义 细胞工程 (cell engineering)是以细胞生物学和分子生物学为基础理论，采用原生质体、细胞或组织培养等试验方法或技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性，以获得具有新的性状的细胞系或生物体以及生物的次生代谢产物，并发展有关理论和技术方法的学科。 细胞工程的核心技术：细胞培养与繁殖 目的：获得新性状、新个体、新物质2 细胞工程的研究范畴动物细胞与组织培养植物细胞与组织培养细胞融合细胞核移植染色体工程胚胎工程干细胞与组织工程转基因生物与生物反应器思考题名词解释细胞工程填空——是一切动、植物生命体的基本组成单位。第二节 动物细胞的形态和生理特征一、动物细胞的形态 动物细胞比原核细胞复杂得多，各种细胞有明确的分工。为了适应其功能的需要，细胞的形态有了相应的变化，即分化。细胞性状各异，有纺锤形的、圆盘形的、立方形的等性状。1.贴壁细胞 生长须有贴附的支持物表面，自身分泌或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长。 两种形态：成纤维细胞型；上皮细胞型2.悬浮细胞 生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长。如淋巴细胞。3.兼性贴壁细胞 生长不严格依赖支持物。如中国地鼠卵巢细胞，小鼠L929细胞。※二、动物细胞的生理特点⒈ 细胞的分裂周期长 细胞分裂时间为12—48h，细胞的分裂周期=间期+分裂期，间期（G1+S+G2），分裂期（M）G1期：4—6h 合成DNA聚合酶 RNA合成S期：6—8h DNA合成G2期：2—5h DNA量加倍, RNA合成M期：0.5—1h 染色体分裂2.细胞生长需贴附于基质,并有接触抑制现象。3.正常二倍体细胞的生长寿命是有限的。 原代培养 有限细胞系 无限细胞系4.动物细胞对周围环境十分敏感; 对理化因素敏感，如：渗透压、pH、离子浓度、剪切 力、微量元素等。⒌动物细胞对培养基要求高 必需氨基酸、维生素、无机盐、微量元素、葡萄糖、细胞生长因子、贴壁因子等。 ⒍动物细胞蛋白质的合成途径和修饰功能与细菌不同。 动物细胞蛋白质的合成部位：游离核糖体；粗面内质网的核糖体 由此可见，动物细胞生产药物缺点:培养条件高、成本贵、产量低。优点:分泌胞外、纯化方便、翻译后修饰糖基化，与天然产品一致。思考题一、填空1.离体培养的细胞可分为两类：————、————2.所有的细胞都含有无机成分，如水和————，以及有机成分，如蛋白质、——、——和————。二、问答简述动物细胞的生理特点。 第三节生产用的动物细胞的要求和获得动物细胞培养是指首先在无菌条件下用消化酶将组织分散成单个细胞，再用培养基制成细胞悬液，使其在体外合适的条件下生长繁殖的技术。一般按以下几个步骤进行：取出细胞所在的组织→培养液漂洗干净→(用锋利小刀割掉多余部分）切成小组织块→置与酶液中分散细胞→低速离心洗涤细胞→将目的细胞吸移至培养瓶中培养。一、生产用动物细胞的要求 原代细胞： --------最早使用 二倍体细胞系：--------以后放宽 转化细胞系： ---------严格要求（担心细胞的核酸会影响人的正常染色体，有致癌危险）※二、生产用动物细胞的获得1、原代细胞：由体内直接取出组织或细胞称为原代细胞。（原代培养即第一次培养，原代培养的细胞大约可以增殖10代）。细胞离体时间短，性状与体内相似，适用于研究。是直接取自动物组织器官,经过粉碎消化而获得的细胞悬液（109/g）。需要大量动物，费钱费劳力。鸡胚细胞、原代兔肾细胞、鼠肾细胞、淋巴细胞2、二倍体细胞系：原代细胞经过传代筛选克隆，从多种细胞成分的组织中，挑选并纯化出某种具有一定特征的细胞株。包括几乎全部的动物，过半数的高等植物。二倍体细胞有正常细胞的特点：①染色体组型是2n核型；②贴壁依赖接触抑制；③可传代培养50代；④无致瘤性。3、转化细胞系：通过某个转化过程形成的，常由于染色体断裂变成异倍体，失去正常细胞特点，而获得无限增殖能力。转化过程可以是自发的，和人工的，从肿瘤组织中。更适合大规模工业化生产特点：①细胞分裂不