SeahorseXF糖酵解压力测试试剂盒用户中文指南-103020-100.pdf

安捷伦Seahorse XF 糖酵解压力测试试剂盒 用户指南 试剂盒 103020-100 1 安捷伦Seahorse XF 糖酵解压力测试试剂盒用户指南 目录 介绍 介绍 4 词汇表 6 试剂盒信息 试剂盒内容 7 试剂盒的运输和储存 7 额外所需的物品 8 实验 实验前一天 11 实验当天 12 数据分析 17 2 安捷伦Seahorse XF 糖酵解压力测试试剂盒用户指南 1 介绍 介绍 4 词汇表 6 安捷伦Seahorse XF 糖酵解压力测试是测量细胞糖酵解功能的标准方法。直接测量细胞外 酸化速率 （ECAR ），见第5 页图1。Seahorse XF 糖酵解压力测试是一种标准和全面的评估 糖酵解通量的关键参数的方法：糖酵解，糖酵解能力，糖酵解储备和非糖酵解的酸化。（详 情请参考第6 页的 “词汇表”。） 3 安捷伦Seahorse XF 糖酵解压力测试试剂盒用户指南 介绍 介绍 糖酵解和氧化磷酸化是细胞内两条主要的能量生产途径。大多数细胞具有在这两条途径之 间转换的能力，从而适应环境的改变。细胞中的葡萄糖 （Glucose ）转变成丙酮酸（称之为 糖酵解），随后在细胞质中转变成乳酸，或在线粒体中转变成CO2 和水。葡萄糖转变成丙 酮酸和后来的乳酸，导致质子的净生产并排到细胞外培养基中 （第5 页图2 ）。质子的排出 导致细胞周围的培养基酸化。 XF 仪器直接测量酸化速率，以ECAR 来表示这一指标。以下是实验流程。首先，细胞在 无葡萄糖和丙酮酸钠的糖酵解压力测试检测液中孵育，并测量ECAR 。第一次注射的是饱 和浓度的葡萄糖。细胞利用加入的葡萄糖并通过糖酵解通路将其分解成丙酮酸，产生 ATP ，NADH ，水和质子。 质子排出到周围溶液中引起ECAR 快速增加。这种葡萄糖诱导的反应被称为基础条件下的 糖酵解速率。第二次注射的是寡霉素 （Oligomycin ），一种ATP 合酶的抑制剂。寡霉素抑 制线粒体ATP 的产生，将能量产生途径转换到糖酵解，随后ECAR 增加显示细胞最大的糖 酵解能力。 最后注射2-脱氧葡萄糖（2-deoxy-glucose ，2-DG ），一种葡萄糖类似物，通过竞争性结合葡 萄糖己糖激酶，糖酵解通路的第一个酶，抑制糖酵解。因此导致的ECAR 减少证实实验中 产生的ECAR 来源于糖酵解。糖酵解能力和糖酵解速率的差值定义为糖酵解储备。葡萄糖 注射之前的ECAR，被称为非糖酵解的酸化；是细胞除糖酵解之外的过程引起的。 4