第11章基因工程新技术 .pptxVIP

第11章 基因工程新技术;1.λ Red 和 RecET 重组系统及其应用2. 位点特异性重组系统及其应用3. 基因打靶4. 基因抑制技术;早在1990s, 研究者发现在酿酒酵母等真菌中具有高效的同源重组系统，仅需要20~40bp长的同源区即可发生重组。可以方便的利用 PCR产物进行基因打靶或替换。 细菌的同源重组频率较低，且需要较长的同源区段. ; 1998年左右，随着对λ噬菌体重组系统的深入研究，发现该重组系统可以在E.coli中实现高效同源重组，且同源区长度要求极低：约40bp。后来，在Rac噬菌体中发现类似的重组系统。随着该技术的应用，出现了一个新的术语：;λRed/ET recombination systems are highlighted by their ability to cross PCR-generated substrates bearing small regions of homology to the target gene (40–50 bp) into bacterial chromosomes, allowing bacterial geneticists to perform PCR-mediated gene replacement;(1) λ Red 系统 及 rac 噬菌体的 RecET系统的原理;(2) 主要应用;9、我们的市场行为主要的导向因素，第一个是市场需求的导向，第二个是技术进步的导向，第三大导向是竞争对手的行为导向。七月-21七月-21Thursday, July 22, 2021 10、市场销售中最重要的字就是“问”。16:06:5316:06:5316:067/22/2021 4:06:53 PM 11、现今，每个人都在谈论着创意，坦白讲，我害怕我们会假创意之名犯下一切过失。七月-2116:06:5316:06Jul-2122-Jul-21 12、在购买时，你可以用任何语言；但在销售时，你必须使用购买者的语言。16:06:5316:06:5316:06Thursday, July 22, 2021 13、He who seize the right moment, is the right man.谁把握机遇，谁就心想事成。七月-21七月-2116:06:5316:06:53July 22, 2021 14、市场营销观念：目标市场，顾客需求，协调市场营销，通过满足消费者需求来创造利润。22 七月 20214:06:53 下午16:06:53七月-21 15、我就像一个厨师，喜欢品尝食物。如果不好吃，我就不要它。七月 214:06 下午七月-2116:06July 22, 2021 16、我总是站在顾客的角度看待即将推出的产品或服务，因为我就是顾客。2021/7/22 16:06:5316:06:5322 July 2021 17、利人为利已的根基，市场营销上老是为自己着想，而不顾及到他人，他人也不会顾及你。4:06:53 下午4:06 下午16:06:53七月-21 ;II 结合反向筛选进行基因替换;;III 介导单链DAN重组，进行基因修饰;重大改进：MAGE技术（Multiplex Automated Genome Engineering） ;Programming cells by multiplex genome engineering and accelerated evolution ;marker;2. 位点特异性重组系统及其应用;两边为13bp反向重复序列，中间位8bp非对称核心序列;（1） 重组机理;当基因组含有一个重组酶识别位点时，转入基因可以发生位点特异性整合，但必须解决整合的稳定性问题;loxp 位点的点突变;（2）主要应用 I 利用位点特异性重组控制转入基因的表达;II 条件缺失突变体的构建;III 利用位点特异性重组进行染色体工程;例：植物中染色体大片段的缺失; 染色体大片段颠倒：两个特异性位点反向排列，重组酶表达后，部分细胞的两个位点之间序列颠倒。;A single chromosomal FRT site becomes the substrate for recombination with FRT-containing replication-deficient plasmids that carries lacZ and lacY, designed in such a way to create either a transcriptional or translational fusion to the promoter of interest.;3.基因打靶及