CCK8原理、优势、步骤.pdfVIP

检测原理： ◆ Cell Counting Kit 简称CCK 试剂盒，是一种基于WST-8 （化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯 基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。 ◆ WST-8 属于MTT 的升级产品，工作原理为：在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还 原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan）。颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反 比。使用酶标仪在450mM 波长处测定OD 值，间接反映活细胞数量。 ◆ CCK 法应用非常广泛，如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性 检测等。 CCK 方法的优势： ◆ 表1 CCK 法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较 检测方法 MTT 法 XTT 法 WST-1 法 CCK 法 甲臜产物的水溶性 差（需加有机溶剂溶解再检测） 好 好 好 产品性状 粉末 2 瓶溶液 溶液 1 瓶溶液 使用方法 配成溶液后使用 现配现用 即开即用 即开即用 检测灵敏度 高 很高 很高 高 检测时间 较长 较短 较短 最短 检测波长 560-600nm 420-480nm 420-480nm 430-490nm 细胞毒性 高，细胞形态完全消失 很低，细胞形态不变 很低，细胞形态不变 很低，细胞形态不变 试剂稳定性 一般 较差 一般 很好 批量样品检测 可以 非常适合 非常适合 非常适合 便捷程度 一般 便捷 便捷 非常便捷 ◆ 酚红和血清对CCK 法的检测不会造成干扰； ◆ 细胞毒性非常低，因此加入WST-8 显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到最佳测定时间。 CCK 法的操作步骤（更多内容请见说明书）： 实验一：细胞活性检测 1、在96 孔板中接种细胞悬液（100μ L/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（37℃,5% CO ）。 2 2、向每孔加入10 μ L CCK 溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD 值的读数）。 3、将培养板在培养箱内孵育1-4 小时。 4、用酶标仪测定在450nm 处的吸光度。 5、若暂时不测定OD 值，可以向每孔中加入10 μ L 0.1M 的HCL 溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板 避光保存在室温条件下。24 小时内测定，吸光度不会发生变化。 实验二：细胞增殖-毒性检测 1、在96 孔板中配置100μ L 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24 小时（37℃，5% CO ）。 2 2、向培养板加入10μ L 不同浓度的待测物质。 3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24 或48 小时）。 4、向每孔加入10μ L CCK 溶液（注意