真核细胞转染试剂(Hifectin.pdfVIP

Hifectin I 真核细胞转染试剂（ Hifectin I transfection reagent ） 货号： M080006 描述： Hifectin I真核细胞转染试剂由阳离子脂质体和辅助脂质以特定比例融合制备而成的单层脂质体悬 液，可与 DNA 或RNA 形成稳定的转染复合物进入细胞，并将核酸释放入细胞内。 Hifectin I 独特的制备方法 增加了脂质体对真核细胞转染的高效性、广谱性、低毒性和可靠性，并使试剂在 4°C储存至少稳定 12个月。 Hifectin I可高效转染多种细胞，属于可被生物降解的脂质体因而细胞毒性明显降低，转染效率与 Invitrogen 的LipofectAMINE 相当，但其价格仅相当同类试剂的 1/3。 转染时只需将 Hifectin I稀释与 DNA 溶液混合并室温放置 15分钟即可转染细胞。 1 ml Hifectin I 可转染 100-500 μg DNA 或50-100 只35mm培养皿或 250-1000 孔 24孔板细胞。 颜色： 清亮或略呈白色胶体溶液。 储存 ：4°C储存 12个月。切勿冻存。 适用： 将 DNA 、RNA 、寡聚核苷酸转入真核细胞。适用于大多数传代或原代细胞。 转染步骤： 以生长于 24 孔板的一个孔内的贴壁细胞为例，使用其它规格培养皿参见表一。 5 细胞准备： 转染前一天传 0.5-2 x 10 细胞于 24孔板内，加 1 ml 正常培养基培养。 在光镜下观察细 胞，当细胞群覆盖培养瓶皿生长表面的 85-95% 时，为 Hifectin I 转染的最佳时机 。这通常需要 18-24 小时，但依细胞类型和接种量而变。注意：传代时接种过多的细胞， 100% 长满的细胞的转 化效率明显降低 制备转染复合物： 对特定细胞类型来说，应该优化加入 DNA ( μg)和 Hifectin I ( l) 比率和绝对μ 量，参见后面附表。推荐 DNA 和 Hifectin I 的初始比例为 1:4。 DNA ( μg) ： Hifectin I ( l) ＝μ 1:2 ～ 1:8 转染实际上是人为造成细胞对外源物质的高摄取状态，因此过量摄入 DNA 和转染试剂将导致细 胞毒性而降低转染效率。与细胞接触的转染混合物中 Hifectin I 的最大浓度不应超过 30 μl/ml ， DNA 浓度应小于 5 μg/ml 。参考表一制备转染复合物，参照表二进行优化。下面的步骤以生长于 24孔板的单孔贴壁细胞为例。悬浮细胞转染参见表一后面的说明。 1. 取 1 μg DNA 稀释到 25 μl 无血清无抗生素培养基，混匀。 2. 取 2-8 l Hifectin Iμ 加入到 25 μl 无血清抗生素培养基，轻轻混匀。 3. 吸取稀释的 DNA 溶液加入到稀释的 Hifectin I 溶液中，上下吹吸混匀，勿振荡。室温孵育 15分 钟。如果按照相反的顺序将稀释的 Hifectin I 溶液与 DNA 混合，将生成相反类型的 DNA 转染复 合物，有可能会导致转染效率下降。 4. 在此期间用无血清培养基洗涤细胞 1-2次，按照表一 Step 5加入适宜体积的无血清无抗生素培 养基。 5. 加入步骤 3 获得的转染复合物于培养瓶皿内，轻轻混合与细胞充分接触，开始转染细胞。 6. 二氧化碳孵箱 37C 孵育细胞 4 小时。 7. 吸除转染混合物，加入含血清的正常培养基；或直接将含血清培养基加到孔内，继续培养 24 小时以上。观察细胞，进行下一步实验。或 1:10稀释传代，进行 G418 筛选。 一 DNA 和转染试剂稀释表