细胞传代标准化步骤.pdfVIP

细胞传代标准化流程： 穿戴好白大褂和手套，用75%酒精擦手； 1、取出细胞，显微镜下观察细胞形态和密度，确定细胞生长状况，是否需要传代或换液； 2、将培养基（如有需要还有血清和大瓶高糖培养基）、PBS、胰酶培养基等预热及超净台消毒 结束后，将试剂及细胞等喷酒精后移入超净台，将废液缸喷足酒精移入超净台，取酒精棉放 入超净台； 3、点燃酒精灯，将瓶口拧松，过火消毒； 4、在确定细胞生长状况良好且没有污染的情况下，将培养皿中的培养基取（大培养皿6ml，中 培养皿3ml）至一个新的15ml离心管中；（一个1ml枪头） 5、用适量PBS清洗细胞表面（大皿5ml，中皿3ml），并弃去PBS；（一个5ml枪头） 6、加入适量胰酶消化细胞（大皿1ml，中皿0.5ml），此时可将细胞置于37°C细胞培养箱内消 化；（C2C12用5min，3T3-L1用1.5min），（一个1ml枪头） 7、待消化完全后，用胰酶6倍体积的完全培养基中止消化，并吹打培养皿皿底，将细胞移入离 心管；（一个5ml枪头） 8、1000rpm，5min离心，离心间隙可以准备好传代的细胞培养皿，并加好培养基； 9、弃上清，口擦酒精，烧口； 10、 加适量完全培养基吹打混匀细胞(沿壁轻轻吹打24次左右)，按合适比例进行细胞传代， 在盖上标记好细胞名称、代数及传