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. .. 间充质干细胞培养方法 1. 间充质干细胞 MSC 基本形态 2. 干细胞应用与干细胞调控。 3. 间充质干细胞 MSC 生长过程 4. 间充质干细胞 MSC 培养的合适气体环境 5. 细胞培养板的选择 6. 如何选用细胞培养基 7. 如何维持培养液 p H 8. 血清与干细胞的培养 9. 胎牛血清（ F B S ）是否需要灭活 10. 细胞的细菌、真菌污染及排除 11. 细胞培养污染的预防 12. 使用胰蛋白酶时加入 E DTA 的目的是什么 13. 胶原酶的种类和选型 14. 胶原酶 V S 胰酶 15. 干细胞的种类和表面标记 16. 间质干细胞培养原理概述 17. 间质干细胞成脂和成骨诱导分化 18. 干细胞老化的表现和处理 19. 细胞传代消化过程指导 20. 冷冻保护剂作用和选择 21. 细胞冻存指导 22. 干细胞冷冻和复苏 23. 移植细胞的基因修饰 1．间充质干细胞 MSC 基本形态 体外培养细胞根据它们在培养器皿是否能贴附于支持物上生长特征， 可分为贴附型生长细胞， 常表现 为成纤维型细胞和上皮细胞。悬浮型细胞在培养中悬浮生长。 间充质干细胞 MSC 基本形态：形态与成纤维细胞类似，细胞在支持物表面呈梭形或不规则三角形生 长，细胞中央有卵圆形核，胞质向外伸出 2 －3 厘米个长短不同的突起。可看到细胞成螺旋状生长。 2 ．干细胞应用与干细胞调控 干细胞的调控是指给出适当的因子条件，对干细胞的增殖和分化进行调控，使之向指定的方向发展。 2.1 内源性调控 干细胞自身有许多调控因子可对外界信号起反应从而调节其增殖和分化， 包括调节细胞不对称分裂的 蛋白，控制基因表达的核因子等。另外，干细胞在终末分化之前所进行的分裂次数也受到细胞内调控 因子的制约。 （1 ）胞内蛋白对干细胞分裂的调控 干细胞分裂可能产生新的干细胞或分化的功能细胞。 这种分化的不对称是由于细胞本身成分的不均等 分配和周围环境的作用造成的。细胞的结构蛋白，特别是细胞骨架成分对细胞的发育非常重要。如在 果蝇卵巢中，调控干细胞不对称分裂的是一种称为收缩体的细胞器，包含有许多调节蛋白，如膜收缩 蛋白和细胞周期素 A 。收缩体与纺锤体的结合决定了干细胞分裂的部位，从而把维持干细胞性状所必 需的成分保留在子代干细胞中。 z . .. （2 ）转录因子的调控 在脊椎动物中， 转录因子对干细胞分化的调节非常重要。 比如在胚胎干细胞的发生中， 转录因子 Oct4 是必需的。 Oct4 是一种哺乳动物早期胚胎细胞表达的转录因子，它诱导表达的靶基因产物是 FGF-4 等生长因子，能够通过生长因子的旁分泌作用调节干细胞以及周围滋养层的进一步分化。 Oct4 缺失 突变的胚胎只能发育到囊胚期，其内部细胞不能发育成内层细胞团。另外白血病抑制因子（ LIF ）对 培养的小鼠 ES 细胞的自我更新有促进作用， 而对人的成体干细胞无作用， 说明不同种属间的转录调 控是不完全一致的。 又如 Tcf/Lef 转录因子家族对上皮干细胞的分化非常重要。 Tcf/Lef 是 Wnt 信号 通路的中间介质，当与 β-Catenin 形成转录复合物后，促使角质细胞转化为多能状态并分化为毛囊。 2.2 外源性调控 除内源性调控外，干细胞的分化还可受到其周围组织及细胞外基质等外源性因素的影响。 （1 ）分泌因子 间质细胞能够分泌许多因子，维持干细胞的增殖，分化和存活。有两类因子在不同组织甚至不同种属 中都发挥重要作用，它们是 TGFβ 家族和 Wnt 信号通路。比如