普通遗传学实验六多倍体的诱发与鉴定.pptx

普通遗传学实验课课件植科院遗传教研室刘焰普通遗传学实验六多倍体的诱发与鉴定 一、实验目的掌握多倍体人工诱发的原理，了解人工诱变的方法。掌握多倍体鉴定的方法。二、实验材料实验材料:蚕豆（2n=2X=12）经染色体加倍处理后的根尖。三、实验用品试剂：卡宝品红染色剂，0.1%秋水仙素，卡诺固定液，1Mol/L HCI仪器及器具：显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片等四、实验原理多倍体广泛地存在于植物界，目前已知被子植物中有三分之一以上的物种是多倍体。其产生途径除自然发生外，也可采用高温、嫁接和射线处理等物理方法和化学药剂处理方法而获得多倍体植株，其中应用最广泛、效果最好的是秋水仙素化学诱导法。 秋水仙素是由百合科植物秋水仙(Colchicum　autumnale L.)中提炼出来的一种生物碱，对植物的种子、幼芽、嫩枝等可产生诱变作用。其作用机理是：阻止微管的聚合作用，从而抑制细胞分裂时纺锤体的形成，使复制后的染色体不能拉向两极，使染色体停滞在分裂中期，但细胞不分裂，不能形成两个子细胞，从而导致染色体加倍，形成多倍体细胞，在此基础上进一步发育成多倍体植物。鉴定多倍体可分直接法和间接法直接法：是将经过秋水仙素溶液处理的根尖、茎尖进行染色体计数，多倍体植株的染色体是加倍的。间接法:除了检查染色体数目变化外，形态特征的变异也是一个重要方面。多倍体植物的气孔、花器、花粉粒、种子、果实等部分明显变大，气孔数目减少而密度变稀，同源多倍体育性有一定的降低，所以同源多倍体中有部分畸形的不育花粉粒。这些常作为染色体数目加倍的辅助性指标。 多倍体植物的气孔增大经秋水仙素溶液处理后的蚕豆根尖明显变大多倍体种子比二倍体种子明显增大1.紫苏二倍体种子；2-6.紫苏多倍体种子经秋水仙素处理后的蚕豆根尖细胞染色体经秋水仙素处理后的洋葱根尖细胞染色体五、实验方法与步骤①材料培养：将蚕豆种子洗净，浸种24hr，待种子吸胀后置于培养皿中，放在25℃温箱中发芽。②加倍处理：当根长约0.5cm时，滴加0.1%秋水仙素浸根处理24-36hr，待根尖明显膨大后，将秋水仙素冲洗干净，切取根尖用卡诺固定液固定2-24hr，再换70%乙醇，置4℃冰箱保存备用。③酸解：用吸水纸将乙醇吸干，加1Mol/L HCI，置60℃水浴锅中水解18min后，将HCI倒掉，用水洗3次，置水中备用。④涂片：切取根尖分生区部分，置载玻片上，用镊子将根尖夹成糊状并涂成薄层，待水分干燥后，加1滴卡宝品红染色液，加盖玻片，染色5min。⑤压片：用吸水纸包住盖玻片的位置，左手将盖玻片固定，右手拿解剖针或镊子敲打盖玻片，最后用大拇指垂直向下压片。⑥显微观察：先在10×镜下调好焦距，找到染色体分散的细胞后，再换40 ×镜下观察统计染色体数目。六、实验结果绘一个分散良好的加倍蚕豆细胞染色体图，并注明倍性。简述秋水仙素诱发多倍体的原理。对多倍体的鉴定，除了检查染色体数目变化外，形态特征的变异也是一个重要方面。多倍体植物的气孔、花器、花粉粒、种子、果实等部分明显变大，气孔数目减少而密度变稀，同源多倍体育性有一定的降低，所以同源多倍体中有部分畸形的不育花粉粒。（注：如果更太大，可将根尖纵剖成若干份，每次取一份涂片），