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试验分析方法 伊灵燕 取样时期：齐口花时采样。 二、 测定指标 （每处理茎/叶各称：12个0.5g； 4个lg； 8个2g。叶绿素另取）: （-）形态指标 1、 株高：用直尺测量 2、 茎粗（最粗处人用游标卡尺测量 3、 节间长：株高/节数 4、 叶长、叶宽、叶柄长：用直尺测量 5、 植株鲜、干重：分为整株、根、地上部、菜薑重和叶重（包括叶片和叶柄） 6、 比叶重：用打孔器，每个重复打20个圆片，烘干，称干重 （―）叶片色素：参照张宪政（1986）的方法， （三）品质指标：分为叶片和菜臺 1、 硝酸盐：比色法（李和生，2000）o 2、 抗坏血酸（VC）含量：比色法，李合生（2000） 3、 可溶性糖：恵酮比色法（李和生，2000）0 4、 可溶性蛋白：考马斯量兰比色法（李和生，2000）o 5、 游离氨基酸：苗三酮显色法，李合生（2002） 6、 类黄酮、可溶性酚：比色法 7、 纤维素（薑干样0.2g）： 四、指标测定方法： 叶绿素 参照张宪政（1986）的方法，菜心叶片鲜样0.5g浸泡在25ml丙酮/无水乙醇（1:1, V:V）溶液中,至叶片发白。测定OD645、OD663和OD440。 叶绿素 a 浓度（mg/L） = 12. 7 X 0D663-2. 69 X 0D645 叶绿素 b 浓度（mg/L） =22. 9X0D645-4. 86X0D663 总叶绿素浓度（mg/L） =8. 02X0D663+20. 20XOD645 类胡萝卜素浓度（mg/L） =4. 7X OD440-0. 27X总叶绿素浓度 叶绿体色素的含量(mg/g)=(色素浓度X提取液体积)/样品鲜重 硝酸盐 比色法 李和生(2000) 500 u g/ml硝态氮(NO3-)标准液:精确称取烘干至恒重KNOs 0.7221 g (0.8145g)溶于去离子水屮，定容至200ml (lOOml)o 5%水杨酸■硫酸溶液：称取5g水杨酸溶于100ml浓硫酸中，搅拌溶解后， 贮于棕色瓶屮，置冰箱屮保存1周有效。 8%氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠溶T 250ml去离子水. 1标准曲线的制作： 吸取500 u g/ml硝态氮(NO3-)标准液1、2、4、6、8、10、12ml分别放入 50ml容量瓶中,用去离子水定容至刻度,使之成10、20、40、60、80、100、 120 P g/ml硝态氮的系列标准溶液。 吸取上述系列标准溶液0.1ml,分别放入刻度试管中，以0.1ml去离子水代替 标准溶液作空白。再分別加入0.4ml 5%水杨酸■浓硫酸溶液，摇匀，在室温下放置 20min,再加入8%NaOH溶液9.5ml,摇匀冷却至室温。显色液总体积为10ml。以 空口做参比，在410nm波长下测定吸光度。以硝态氮浓度为横坐标，吸光度为纵坐 标，绘制标准曲线并计算出回归方程。 2样品中硝酸盐的测定(1)样品液的制备：取一定量的植物材料剪碎混匀，精确 称取材料2g,重复3次，分别放入3只刻度试管中，各加入10mL无离子水，封口， 置入沸水浴屮提取30min取出，用门来水冷却，将提取液过滤到25mL容量瓶屮， 并反复冲洗残渣，最后定容至刻度。 样品液的测定：吸取样品液O.lmL分别于3支试管中，然后加入5%水杨 酸■硫酸溶液0.4mL,混匀后置室温下20min,再慢慢加入9.5mL 8%NaOH溶液，摇 匀，待冷却至室温后，以空白作参比，在4I0nm波长下测其光密度。在标准曲线上 查得或用回归方程计算出硝态氮浓度，计算样品屮的硝态氮含量。 单位鲜蛋样品中硝态氮含量=专三$_(皿/吕) 式中：X为由冋归方程计算出的硝态氮浓度，u g/ml； V1为样品定容体积，ml； W为样品 重量，g： V2为测定取用的样品提取液体积，mL 2?Vc含量的测定 比色法，李合生(2000) 1%草酸：1.4g草酸溶于lOOmL水 2%草酸：2.8g草酸溶于lOOmL水 30%硫酸锌:53.4g溶于1 OOmL水 15%亚铁氤化钾:17.2g溶于］OOmL水 染料溶液：称取lOOmg 2, 6—二氯酚靛酚和82mg碳酸氢钠溶于约60mL热水 屮，过滤定容至100 mL容量瓶屮，倒人棕色试剂瓶存放于冰箱内。使用时稀释4 倍，此溶液每毫升约相当于O.lmg的维生索C 抗坏血酸标准溶液：精确称取lOOmg分析纯抗坏血酸，溶于1%草酸，定容至 lOOmL,再从屮吸取5 mL,用1%草酸再稀释至100 mL,稀释后每毫升含抗坏血酸 0.05mg (标准溶液在使用前临时配制)。 二甲苯：分析纯 ?标准曲线 取具塞人试管6个.分别吸取抗坏血酸标准溶液0mL,lmL,2mL,2.5mL,3 mL,4 mL, 用1%草酸补充至4mL。各管中抗坏血酸含量相应为0、0.05mg O.lOmg、0.125mg、