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微生物检验学之培养基 微生物检验学之培养基 微生物检验学之培养基 培养基 培养基是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。适宜的培养基不仅可用于细菌的别离纯化培养、传代、菌种保存，还可用于研究细菌的生理、生化特性，是病原菌别离鉴定的重要环节和必不可少的手段。 一、培养基的组成成分 二、培养基种类 三、别离培养基的选择 一、培养基的组成成分 〔一〕营养物质 细菌需要的根底营养物质应含有氮源、碳源、无机盐类和生长因子等，常用的营养物质如下： 蛋白胨 提供氮源。 是动物或植物蛋白质经酶或酸碱分解而成。含胨、多肽和多种氨基酸，为大多数细菌生长所利用，尤其是含大量色氨酸的胰蛋白胨，更适于测靛基质用的蛋白胨。蛋白胨易溶于水，遇酸 不沉淀，不因受高温而凝固，并对两性电解质有缓冲作用。但吸水性强，应注意枯燥密封保存。 肉浸液 是用新鲜牛肉浸泡、煮沸而制成的肉汁。其中含有可溶性含氮浸出物〔肌酸、黄嘌呤、腺嘌 呤、次黄嘌呤核苷酸、谷氨酸、甘氨酸等〕和非含氮浸出物〔肝糖、乳酸、琥珀酸、磷酸己糖、脂肪、无机盐类等〕。 还有一些生长因子。 肉浸液提供氮源和碳源，但肉浸液中所含氮物质过少而不能满足细菌的需要，因此在制备培养基时应再参加 1%～ 2%的蛋白胨和 0.5%氯化钠。 牛肉膏 由肉浸液经长时间加热浓缩而制成。 糖类在加热过程中被破坏， 所以其营养价值低于肉浸液， 但因无糖可用作肠道杆菌鉴别培养基的根底成分。由于使用方便， 常用于制备培养基。 糖类、醇类 提供碳源和能源。 制备培养基所用的糖类、醇类有多种，常用的糖类有单糖〔葡萄糖、阿拉伯糖等〕、双糖〔乳糖、蔗糖等〕和多糖〔淀粉、菊糖等〕；常用的醇类有甘露醇、卫茅醇等。除葡 萄糖、蔗糖主要作为碳源和能源的根本成分外，其他糖类和醇类主要用于鉴定细菌所做的发酵反响。 无机盐类 提供细菌生长的各种元素，如：钾、钠、铁、镁、钙、磷、硫等。用于制备培养基的无机盐类有多种，其 中最常用的有氯化钠和磷酸盐，前者对维持酶的活性、调节菌体内外的渗透压非常重要，后者是细菌良好的磷源，并在培养基中具有缓冲作用。 鸡蛋和动物血清 虽然不是构成培养基的根本成分，但却是某些细菌生长所必需的营养物质，所以仅用于制备一些特殊的培养基， 这些细菌直接从鸡蛋和动物血清中获取营养。如培养结核分枝杆菌的鸡蛋培养基和培养白喉杆菌的吕氏血清培养基等。 生长因子 是细菌生长所必需的，但需要量很小。在制备培养基时，常在肝浸液、肉浸液、酵母浸液和含血液培养基中参加维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等生长因子。 〔二〕凝固物质 制备固体培养基时，需要在液体中参加凝固物质。最常用的凝固物质为琼脂，特殊情况下也可用明胶、 卵白蛋白、血清等。无营养作用。 〔三〕抑制剂和指示剂 用于选择、鉴定及判断结果。 抑制剂 有选择抑制作用，抑制非检出菌〔非病原菌〕的生长，以利于检出菌〔病原菌〕的生长。常用的有胆盐、煌绿、亚硫酸钠、亚硒酸钠及一些染料和某些抗生素等。 指示剂 观察细菌是否利用和分解培养基中的糖、醇类。 常用的有酚红、中性红、甲基红、溴甲酚紫、溴麝香草酚蓝、中国蓝等酸碱指示剂。 亚甲蓝常用作氧化复原指示剂。 二、培养基种类 根底培养基 含有根底生长所需的根本营养成分，最常用的是肉浸液，俗称肉汤 ，主要成分含牛肉浸液和蛋白胨。 根底培养基广泛用于细菌的增菌、检验，也是制备其他培养基的根底成分。 营养培养基 在根底培养基中可参加葡萄糖、血液、生长因子等特殊成分，供营养要求较高的细菌和需要特殊生长因子的细菌生长。 最常用的是血琼脂平板、巧克力血平板等。 3. 鉴别培养基 利用细菌分解糖类和蛋白质的能力及其代谢产物的不同， 在培养基中参加特定的作用底 物和指示剂，观察细菌生长过程中分解底物所释放的不同产物，通过指示剂的反响不同来鉴别细菌。 例如糖发酵管、克氏双糖铁琼脂〔 KIA〕、伊红 - 亚甲蓝琼脂和动力 - 吲哚 - 尿素〔 MIU〕培养基等。 选择培养基 在培养基中参加抑制剂，去抑制标本中的杂菌生长，有助于所选择的细菌种类的生长。例如培养肠道致病菌的 SS 琼脂，其中的胆盐能抑制革兰阳性菌，枸橼酸钠和煌绿能抑制大肠埃希菌，因而使致病的沙门菌、志贺菌容易别离到。 特殊培养基 包括厌氧培养基和细菌 L 型培养基等。 前者是培养专性厌氧菌的培养基，除含营养成分外，还参加复原剂以降低培养基的氧化复原电势，如疱肉培养基、巯基乙醇酸钠培养基等。后者是针对细 胞壁缺损的细菌 L 型，由于胞内渗透压较高，故培养该菌时必须采用高渗〔 3%～ 5%NaCl、 10%～ 20%蔗糖或7%聚乙烯吡咯烷酮等〕低琼脂培养基。 三、别离培养基的选择 临床标本送往细菌实验室后，应立即接种到适当的别离培养基上。依据卫生部临床检验中心推荐，细菌实验室应备有如下别离培养基