色谱法—高效液相色谱法.pdfVIP

附錄 IV （B） 色譜法 — 高效液相色譜法 附錄 IV （B ） 色譜法 — 高效液相色譜法 高效液相色譜法是由固體固定相及液體流動相組成的分離技術。供試品經進樣 閥注入，由流動相帶入柱內，各成份被固定相分離，依次通過檢測器，記錄色 譜圖。 （1） 供試品的製備 — 測定前，將藥材樣品粉碎，通過二號篩。供粉碎的樣品量 應為測定量的五倍以上。 （2 ） 儀器的一般要求 — 按各藥材品種項下的規定，選擇液相色譜的固定相和流 動相。十八烷基鍵合硅膠為其中一種最常用的填充劑。離子交換填充劑， 用於離子交換色譜法。多孔硅膠或高分子微球填充劑，用於分子排阻色譜 法。色譜柱溫度常為室溫，常用檢測器為紫外吸收檢測器。 各藥材品種項下規定的固定相種類及流動相組分、檢測器類型，均不應改 變。必要時，其餘條件可適當改變，以符合系統適用性試驗的要求。 （3 ） 系統適用性試驗 — 是指按各藥材品種項下有關系統適用性的規定，對儀器 進行適用性試驗，用規定的化學對照品對儀器進行調整，以適應該藥材項 下規定的參數要求，如色譜柱的理論塔板數 （n）、重複性、分離度 （R）和 拖尾因子 T 。 （ ） （a） 理論塔板數 n — 理論塔板數用於衡量色譜柱的效能。其值應不低於 （ ） 各藥材品種項下的規定。按下列公式計算理論塔板數︰ 式中 t R = 對照品溶液指標成份峰或供試品溶液待測峰的保留時間； Wh / 2 = 對照品溶液指標成份峰或供試品溶液待測峰二分之一峰 高處的峰寬。 （b ） 重複性 — 重複性是指取對照品溶液，至少重複進樣 5 次，計算峰面積 及保留時間的相對標準偏差，應符合各藥材品種項下規定。 （c ） 分離度 （R）— 為保證定量分析準確，除另有規定外，待測峰與鄰近峰 的分離度 （圖1）應大於 1.5。按下列公式計算分離度： A-12 附錄 IV （B ） 色譜法 — 高效液相色譜法 2 （t t R 2 R 1 R = W 1 W 2 t R1 及 t R2 = 各為相鄰二峰 （峰1及峰 2）的保留時間； W 1 及W 2 = 各為相鄰二峰 （峰1及峰 2）的峰寬。 （d ） 拖尾因子 （T ）— 測量時，尤其當採用峰高法，須檢查待測峰的拖尾因 子 （圖2 ）。該數值亦應符合各藥材品種項下的規定。按下列公式計算 拖尾因子： W 0.05h T = 2d 1 W 0.05h = 0.05 峰高處的峰寬； d1 = 峰頂垂直 至 0.05 峰高處前沿之間的距離。 （4 ） 定量操作程序 — 參照儀器說明書的操作說明，裝配高效液相色譜儀器。按 規定的高效液相色譜條件，注入適量系列濃度的對照品溶液，繪製標準曲 ，進行分析。在相同色譜條件下，與對照品溶液的保留時間比較，鑒定 供試品溶液色譜中的待測成份