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分子生物学之应用与发展 分子生物学之应用与发展 授 课 教 师：李 元 凤 一 、重组DNA (Recombinant DNA)的步骤 1. 选择载体(cloning vector) 2. 以适当的限制??(restriction endonuclease)切分载体 3. 将欲选殖或增幅之外来DNA与载体接合(ligation)，形成杂合DNA (hybrid DNA) 4. 将杂合DNA送入宿主(host)细胞中，此谓转型(transformation) 5. 筛选及鉴定正确之杂合DNA ?载体的来源 1. 细菌: 细菌体内含有会自行复制之小分子核酸个体 2. 噬菌体(bacteriophage) 3. 酵母菌(yeast): 酵母菌体内含有会自行复制之核酸个体 ?重组DNA的来源 1. 化学合成 2. 大分子DNA以限制??切成小分子DNA 3. mRNA反转录(reverse transcription)合成cDNA ?转型 1. 利用细菌转型法将杂合DNA送回细菌体内 2. 利用酵母菌转型法将杂合DNA送回酵母菌体内 129 二、 分离与选殖单一基因 1. 重组DNA技术可以增幅，或是鉴定未知基因之DNA序列及其功能。