人型腺病毒重组六邻体蛋白的纯化及免疫学研究.doc

人型腺病毒重组六邻体蛋白的纯化及免疫学研究 ———————————————————————————————— 作者： ———————————————————————————————— 日期： 目 录 中文摘要…………………………………………………………………………… 2 英文摘要…………………………………………………………………………… 3 文献综述…………………………………………………………………………… 4 前言………………………………………………………………………………… 13 实验材料…………………………………………………………………………… 15 实验方法…………………………………………………………………………… 21 实验结果…………………………………………………………………………… 27 讨论………………………………………………………………………………… 32 结论………………………………………………………………………………… 35 参考文献…………………………………………………………………………… 36 致谢………………………………………………………………………………… 41 个人简历…………………………………………………………………………… 42  中文摘要 目的 腺病毒(Adenovirus,AdV)是引起人类呼吸道和消化道感染的重要病原之一，严重威胁着人类的安康。腺病毒导致小儿肺炎，尤其是6个月至2岁的婴幼儿腺病毒肺炎最为严重，感染主要是以3, 5, 7型为主,所以建立有效的防治腺病毒感染措施意义重大。六邻体是腺病毒主要的构造蛋白，能够刺激机体产生相应的抗体，抑制病毒体构象的改变，从而中和病毒体。本实验组已经成功克隆并表达了重组人3型腺病毒六邻体L1、L2亚基，本次实验旨在纯化重组六邻体亚基蛋白，检测其抗原性、特异性及体外保护情况。方法在原核表达系统 M15中高效表达重组人3型腺病毒六邻体蛋白。利用Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱进展蛋白纯化。用纯化的重组六邻体蛋白免疫新西兰家兔,利用免疫印迹技术检测其血清中抗体，鉴定该蛋白的免疫原性和反响原性。利用固定病毒-稀释血清方法进展中和实验，计算其中和抗体效价。结果　得到纯化的重组人3型腺病毒六邻体蛋白，该蛋白免疫动物后产生高效价抗体,到达1：1024000，该抗体能与人3型腺病毒、含有该蛋白的重组工程菌株以及重组六邻体蛋白发生特异性的免疫印迹反响(Western blot)， M15菌株、BSA蛋白、柯萨奇病毒和Hela细胞等反响，证明该重组六邻体蛋白具有良好的免疫原性和反响原性以及3型腺病毒特异性。在中和实验中，该抗体可以有效地中和人３型腺病毒的感染，中和效价为1:800，结论　所获得的重组人3型腺病毒六邻体蛋白具有良好的抗原性和特异性,其产生的抗体具有良好的保护作用，为开发研制高效、无毒的腺病毒基因工程疫苗奠定根底。 [关键词] 六邻体；纯化；免疫保护；中和抗体 Purification and study on the immunology of recombinant hexon of human type-3 adenovirus Abstract Object: The adenovirus one of the main pathogeny which cause respiratory tract and alimentary infection and cause more and more serious. Adenovirus can cause child pneumonia and the major infected types are type 3, 5 and 7 et al，so to establish an effective step to prevention and cure Adenovirus infection has a significant meaning. Hexon is the major structure protein of adenovirus. It stimulates the body to produce anti-body and inhibits construct shift of virus to neutralize the virus body itself.we have already cloned and expressed the recombinant hexon of human type-3 adenovirus.Now we intend to purify the recombinant hexon of human type-3