临床免疫学检验的质量保证.pptVIP

加样 ◎在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。 ◎加样应用微量移液器（加样枪)按规定的量加入微孔板的1/3处避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。 ◎每次加样应更换吸嘴，做到一人一吸头，以免发生交叉污染;干吸头预先在血清中抽吸三次。 第三十一页，共56页 加样 ◎样本稀释，目的是为了减少非特异性反应，所以一定要先加稀释液后加样本，特别注意加样后要在微量振荡器上振荡30秒钟，同时注意防止液体溢出。如后面操作步骤中加二种以上试剂时均需振荡混匀。 ◎如用滴瓶滴加试剂应先将滴瓶摇匀并挤去第一滴有气泡的试剂后加样。 第三十二页，共56页 ELISA竞争法的本质：酶标抗体与样本抗体在同样体系中，与固相抗原竞争结合是等比例关系。 正确的加样：应该先将样本与酶标抗体混合均匀，然后加入孔中反应。 实际工作中 分开加 第三十三页，共56页 分开加会造成先加入的先结合，与后加入者并不是公平竞争关系，也不符合等比例原则。特别是在放置时间过长，温度过高的情况下，对结果的影响很大。 有研究表明，2min后加入酶标抗体，由于标本比酶标抗体先结合了2min，因此可出现7.4%的假阳性。30min后再加，假阳性率高达57.4%。 第三十四页，