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第十五章 重组人干扰素生产工艺;主要内容;1 .干扰素概述;1.1 干扰素的种类;天然干扰素分类;;1.2干扰素的理化性质;
Ⅰ型干扰素具有广谱的抗病毒活性,对多种病毒如DNA病毒和RNA病毒均有抑制作用;但这种效应不是直接的,而是通过对宿主细胞的作用引起的。
①对干扰素敏感的细胞表面存在于干扰素受体,核内有“抗病毒蛋白”基因,受干扰素作用后该基因活化,产生的抗病毒蛋白可阻止病毒mRNA翻译,并促进病毒mRNA降解。
②干扰素能提高细胞表面MHCⅠ类分子的表达水平,受到病毒感染的细胞表面MHCⅠ类分子的增加有助于向Tc细胞递呈抗原,引起靶细胞的溶解。
③干扰素可增强NK细胞对病毒感染的杀伤能力。
;;抗肿瘤作用机制;免疫调节活性机制;1.4 重组干扰素的临床应用;1.5.干扰素生产工艺路线(1);干扰素生产工艺路线(2);干扰素生产工艺路线(3);干扰素生产工艺路线(4);干扰素生产工艺路线(5);2. 基因工程假单胞杆菌的构建与保藏;2.1、基因工程假单胞杆菌菌种建立;第一步:干扰素基因的克隆(RT-PCR);第二步:表达载体构建;第三步:工程菌构建;2.2基因工程菌的特性;2.3 菌种库的建立与保藏;3 .干扰素α-2b的发酵工艺过程;3.1摇瓶培养;3.2 种子罐培养;3.3 发酵罐培养;3.4.菌体收集;4 干扰素的分离纯化工艺过程;4.1 干扰素α-2b分离工艺过程;(1)菌体裂解;(2)预处理-沉淀;(3)离心;(4)初级分离;4.2、干扰素纯化工艺过程;(1) 溶解粗干扰素;(2) 沉淀与疏水层析;;(3)阴离子交换层析与浓缩;(4)阳离子交换层析与浓缩;(5)凝胶过滤层析;(6)无菌过滤分装;(7)检测项目
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