猪瘟的间接免疫荧光实验.pptVIP

文档如有侵权，请联系本人协改正删除，内容如有不当之处，请联系本人改正或者删除，谢谢。 猪瘟的间接免疫荧光实验 一、试验目: 了解和掌握猪瘟临床诊疗方法和试验室诊疗方法（间接免疫荧光法）。 荧光免疫显微技术 直接法---荧光素标识Ab直接检测 间接法---荧光素标识二抗 补体结正当---荧光素标识抗补体Ab 双结正当---两种荧光素标识Ab 二、试验原理: 固定在载片上待检病变组织与合适稀释猪瘟阳性血清反应后, 假如待检组织中有猪瘟病毒抗原就会与猪瘟阳性血清中抗体特异性结合, 加入FITC(异硫氰酸荧光素)标识兔抗猪IgG二抗又可与猪瘟阳性抗体特异性结合, 在荧光显微镜下可见展现绿色荧光。 能够产生显著荧光并能作为染料使用有机化合物称为荧光色素或荧光染料。用于标识抗体荧光色素, 必需含有化学上活性基因, 能与蛋白质稳定结合, 且不影响标识抗体生物活性及抗原抗体特异性结合。 异硫氰酸荧光素(FITC) 荧光二抗 荧光素 发射的荧光色 激发波长（nm） 发射波长（nm） 异硫氰酸荧光素 （FITC） 绿 495 528 四乙基罗丹明 RB200 红 570 595 荧光素及其激发波长和发射波长 三、试剂与仪器: 1.猪瘟病料、抗原片、FITC荧光标识兔抗猪二抗、PBS缓冲液、猪瘟标准阴、阳性血清、封片介质:磷酸盐缓冲甘油、盖玻片、