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倒平板、划平板、涂布操作步骤
一、无菌准备:
、提前 1 个小时打开无菌室紫外灯消毒灭菌
、操作者的衣着和手,进行清洁和消毒;
、将用于微生物培养的器皿、接种的用具和培养基等进
行灭菌;
、所有无菌操作都需在酒精灯旁操作。
二、培养基配置:
、 LB 肉汤:肉汤粉 330g 、 5g 葡萄糖、 1000ml 蒸馏水;
、营养琼脂培养基: 琼脂培养基粉 300g 、 5g 葡萄糖、
1000ml 蒸馏水。
三、倒平板操作:
、将灭菌过的培养皿放在火焰旁的桌面上,右手拿装有培
养基的锥形瓶,左手拔出棉塞。
右手拿锥形瓶,使瓶口迅速通过火焰;
2、用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,右手将锥
形瓶中的培养基(约 10?20ml )倒入培养皿,左手立即盖 上培养皿的皿盖,轻轻摇匀。
3、等待平板冷却凝固 (大约需5?10min )后,将平板倒过
来放置,使皿盖在下,皿底在上。
四、平板划线操作:
、将接种环放在火焰上灼烧,直到接种环烧红;
2、在火焰旁冷却接种环,并打开盛有菌液的试管的棉塞;
3、将试管口通过火焰;将已冷却的接种环伸入菌液中,沾
取一环菌液;将试管口通过火焰,并塞上棉塞;
4、左手将皿盖打开一条缝隙,右手将沾有菌种的接种环迅
速伸入平板内,划三至五条平行线,盖上皿盖。注意不要划
破培养基。
5、灼烧接种环,待其冷却后,从第一区域划线的末端开始
往第二区域内划线。重复以上操作,在三区域内划线。注意
不要将最后一区域的划线与第一区相连。
6、将平板倒置,放入培养箱中培养。
五、涂布平板操作:
、将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中;
2、取少量菌液(不超过 0.1ml ) ,滴加到培养基表面;
3、将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃尽后,
冷却8?10s ;
4、用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转
动培养皿,使涂布均匀。
注意: 1 、将涂布器末端浸在盛有体积分数为 70% 的酒精
的烧杯中。取出时,要让多余的酒精在烧杯中滴尽,然后将
沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。
、操作中一定要注意防火!不要将过热的涂布器放在
盛放酒精的烧杯中,以免引燃其中的酒精。
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