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生物化学实验报告酵母RNA提取与鉴定 生物化学实验报告酵母RNA提取与鉴定 PAGE PAGE / NUMPAGESPAGE3 生物化学实验报告酵母RNA提取与鉴定 PAGE 实验五酵母RNA的提取与判断 一、实验目的 1.掌握稀碱法分别酵母 RNA的原理与操作过程。 2.认识RNA的组分并掌握定性判断的详尽方法。 二、实验原理 1.酵母核酸中RNA含量很多，DNA含量则少于2%。 可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其积淀，有此可得粗RNA制品。 3.用碱液提取的RNA有不相同程度的降解 三、实验仪器 1.离心计 2.水浴锅 3.电炉 4.烧杯 5.量筒 四、实验试剂 1.干酵母粉 2.0.2%氢氧化钠溶液：2g氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至 1000ml。 3.乙酸 4.95%乙醇 5.无水乙醚 1/3 6.10%硫酸 7.氨水 9.5%硝酸银溶液：5g硝酸银溶于蒸馏水并稀释至 100ml，贮于棕色瓶中。 1.苔黑酚-三氯化铁溶液： 100mg苔黑酚溶于100ml浓盐酸中，再加入100mgFeCl 。 临用时配制。 五、实验步骤 的提取： （1）称取2g干酵母粉于100ml烧杯中，加入 0.2%氢氧化钠溶液10ml，开水浴加热 30分钟，经常搅拌（如开水浴过程中 溶液蒸干可再加5~10ml氢氧化钠）。尔后加入乙酸数滴，使提取液呈酸性（pH试纸检验），离心10-15分钟（）。 2）取上清液，加入2倍体积的95%乙醇，边加边搅，加毕，静止，待完好积淀，过滤。 3）滤渣先用95%乙醇洗2次，每次约5毫升，再用无水乙醚洗2次，每次也约5ml。 4）冲洗时可小心地用玻璃棒搅动积淀。乙醚滤干后，滤渣即为粗RNA，可判断。 2.判断： （1）取上述RNA约 ，加10%硫酸5ml,加热至沸1—2分钟，将RNA水解。 2/3 （2）取水解液 ，加入苔黑酚-三氯化铁溶液1ml，加热至沸1分钟，观察颜色变化。 3）水解液2ml，加入氨水2ml和5%硝酸银溶液1ml，观察可否产生絮状嘌呤银化合物。 六、实验结果 加热至沸1分钟后，溶液变成绿色；产生絮状嘌呤银化合物积淀 七、实验解析 实验注意事项 1.过滤时,冲洗不能够带水,否则积淀粘在滤纸上取不下来。 2.有时絮状积淀出现较慢 ,可放十多分钟。 3.利用等电点控制 RNA析出时，应严格控 pH。 4.离心的时候，要两两对称放置，且离心管中溶液的量基本相同。否则会遭成离心计转子的损坏。 3/3