呈递SARS-COV-2的RBM不同区域肽表位的病毒样颗粒疫苗构建方法发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 113150082 A (43)申请公布日 2021.07.23 (21)申请号 202011586020.3 A61K 39/215 (2006.01) A61P 31/14 (2006.01) (22)申请日 2020.12.29 (71)申请人 中国医学科学院医学生物学研究所 地址 650106 云南省昆明市茭菱路935号医 学生物学研究所 (72)发明人 马雁冰　龙琼　杨英　黄惟巍　 白红妹　孙文佳　杨旭　李多　 (74)专利代理机构 昆明正原专利商标代理有限 公司 53100 代理人 徐玲菊　于洪 (51)Int.Cl. C07K 14/02 (2006.01) C12N 15/50 (2006.01) C12N 15/86 (2006.01) C12N 15/66 (2006.01) 权利要求书2页 说明书11页 序列表4页 附图6页 (54)发明名称 呈递SARS-COV-2的RBM不同区域肽表位的病 毒样颗粒疫苗构建方法 (57)摘要 本发明涉及一种呈递SARS‑COV‑2的RBM不同 区域肽表位的病毒样颗粒疫苗构建方法，包括以 下步骤：在SARS‑COV‑2的RBM中筛选不同的肽表 位，将该基因插入到乙肝病毒核心抗原HBcAg的 78‑79位氨基酸之间，得到重组质粒pHBcAg‑P2、 pHBcAg‑P3、pHBcAg‑P4、pHBcAg‑P6，将该质粒转 化大肠杆菌DH5α或BL21感受态细胞上，用IPTG 诱导、纯化，得到呈递P2，P3，P4，P6的病毒样颗粒 疫苗。只需几次免疫注射该疫苗即可诱导强的针 对自身分子的、有持续作用的中和性抗体，以中 和新型冠状病毒的感染，为新型冠状病毒疫苗研 A 发提供新思路并奠定坚实基础。 2 8 0 0 5 1 3 1 1 N C CN 113150082 A 权　利　要　求　书 1/2页 1.呈递SARS‑COV‑2的RBM不同区域肽表位的病毒样颗粒疫苗构建方法，其特征在于，包 括以下步骤： 步骤（1），合成SARS‑COV‑2的RBM中P2、P3、P4、P6肽表位基因； 步骤（2），将编码截断的乙肝病毒核心抗原HBcAg克隆到pThioHisA载体，再将步骤1）得 到的编码P2、P3、P4、P6基因插入到乙肝病毒核心抗原HBcAg的78‑79位氨基酸之间，得到重 组质粒pHBcAg‑P2、pHBcAg‑P3、pHBcAg‑P4、pHBcAg‑P6； 步骤（3），将步骤（2）得到的重组质粒pHBcAg‑P2、pHBcAg‑P3、pHBcAg‑P4、pHBcAg‑P6转 化大肠杆菌DH5α或BL21感受态细胞上； 步骤（4），用IPTG诱导表达步骤（3）的转化有重组质粒pHBcAg‑P2、pHBcAg‑P3、pHBcAg‑ P4、pHBcAg‑P6的大肠杆菌DH5α或BL21，纯化，分别得到呈递P2、P3、P4、P6的四个病毒样颗粒 疫苗。 2.根据权利要求1所述的呈递SARS‑COV‑2的RBM不同区域肽表位的病毒样颗粒疫苗构 建方法，其特征在于，步骤（1）中，合成SARS‑COV‑2的RBM中P2、P3、P4、P6肽表位基因采用的 引物如下： 编码P2基因的上游引物(5’端)：gatcttacctgta