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遗传修饰动物模型.ppt

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遗传修饰动物模型;第一节转基因动物概念及其发展简史;第一节转基因动物概念及其发展简史;第一节转基因动物概念及其发展简史;第一节转基因动物概念及其发展简史;第一节转基因动物概念及其发展简史;1、第一例嵌合体小鼠 1974年最早把猿猴病毒40(SV40)注入小鼠囊胚腔中得到部分组织中含有SV40DNA嵌合体小鼠。但无任何表型改变。 2、第一个转基因小鼠系 1976年建立了世界上第一个转基因小鼠系, 这些小鼠基因组中插人了莫氏白血病病毒基因。她们是利用反转录病毒与小鼠卵裂球共培养把外源DNA插入到小鼠基因组中。 3、第一例显微注射法产生转基因小鼠 1980年, Gordn等把SV40DNA显微注射到小鼠受精卵原核中, 取得了两只转基因小鼠, 创建了显微注射转基因方法。;4、“超级鼠” 1982年, Palmiter和Brinster用此方法把大鼠生长激素基因导入小鼠受精卵, 取得了成年体重是对照组小鼠2倍“超级鼠”, 首先证实外源基因可在受体中表示, 而且表示产物含有生物活性。 5、转基因家畜产生转基因家兔、绵羊和猪(Hammer等, 1985)、牛(Bondioli等, 1988)和山羊(Ebert等, 1991)等相继出世。;Date;Date;6、利用转基因生产重组蛋白 1987年, Simons等在转基因小鼠乳汁中得到绵羊β-球蛋白, 1988年, 该研究小组又从转基因绵羊乳汁中得到了α-抗胰蛋白酶。现在, 已经有数十种蛋白实现了转基因生产。 7、转YAC转基因小鼠 近10年内, 陆续出现用全长酵母人工染色体(YAC)DNA来产生转基因小鼠。;东北农业大学-中国首例绿色荧光蛋白“转基因”克隆猪 绿色荧光蛋白-猪胎儿成纤维细胞-克隆;1987年, 世界上第一只商业化转基因绵羊在英国著名罗斯林研究所诞生。转基因母羊乳汁中能够分泌α-抗胰蛋白酶。;2010年, FDA同意转基因鲑鱼;转基因动物意义: ;(l)疾病型转基因动物 替换: 避免了人体试验造成风险和伦理问题。 潜伏期长, 病程长和发病率低疾病 可控: 品系, 感染病原体 试验环境 方便: 样品搜集 结果分析轻易(统计); 人畜共患病比较, 研究疾病机理;(2)利用转基因动物制药: 生物反应器重组蛋白药品 欧洲医药评价署人用医药产品委员会 2006年6月2日首次同意了用转基因山羊奶研制而成抗血???药品Atryn(抗凝血酶)上市 现在世界上还有利用转基因绵羊、牛和兔乳腺生物反应器生产人α-抗胰蛋白酶(抗蛋白酶缺乏性肺气肿药品)、重组组织血纤维蛋白溶酶原激活剂(抗栓药)和人C1抑制剂(诊疗血管神经性水肿药品)等重组蛋白药品也已经完成或进入临床Ⅲ期试验, 尤其是诊疗性抗体药品, 发展潜力更大。 ;现在已在下列动物乳汁中生产出部分人类蛋白质药品: 牛: 抗凝血酶、纤维蛋白原、人血清白蛋白、胶原蛋白、乳铁蛋白、糖基转移酶、蛋白C等; 山羊: 抗凝血酶原、抗胰蛋白酶、血清白蛋白、组织纤溶原激活因子、单克隆抗体等; 绵羊: 抗胰蛋白酶、凝血因子Ⅸ、蛋白C; 猪: 凝血因子Ⅸ、蛋白C、纤维蛋白原、血红蛋白。;第二节  研制转基因动物基础步骤;第二节  研制转基因动物基础步骤;目基因分离与克隆;构建转基因载体;?转基因动物技术路线;转基因动物技术路线(续);?转基因动物技术路线(续);?转基因动物技术路线(续);表示调控元件+目基因 +汇报基因;1.外源目基因分离 2.外源目基因与转性基因表示开启子、增强子、汇报基因等构件拼接重组 3.重组DNA导入生殖细胞或胚胎干细胞 4.胚胎移植技术 5.判定及筛选 6.目基因整合率及表示效率检测;第二节  研制转基因动物基础步骤;第二节  研制转基因动物基础步骤;第二节  研制转基因动物基础步骤;第二节  研制转基因动物基础步骤;第二节  研制转基因动物基础步骤;Date;第二节  研制转基因动物基础步骤;绝缘子元件阻断邻近增强子活性 ;第二节  研制转基因动物基础步骤;第二节  研制转基因动物基础步骤;Date;Date;Date;第二节  研制转基因动物基础步骤;第二节  研制转基因动物基础步骤;第二节  研制转基因动物基础步骤;Date;Date;Date;第二节  研制转基因动物基础步骤;第二节  研制转基因动物基础步骤;第二节  研制转基因动物基础步骤;第二节  研制转基因动物基础步骤;第二节  研制转基因动物基础步骤;第二节  研制转基因动物基础步骤;operation panel ;显微注射法 显微注射法是在显微注射仪上, 一侧用吸管固定受精卵, 另一侧将注射针插入受精卵原核(通常是雄原核)。拔出显微注射针解除固定管负压, 操作完成。 ;Date;第二节  研

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