基于微液滴数字分析的新型冠状病毒核酸定量检测试剂盒发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 112813195 A (43)申请公布日 2021.05.18 (21)申请号 202011429680.0 C12Q 1/6851 (2018.01) (22)申请日 2020.12.09 (71)申请人 广州市第一人民医院（广州消化疾 病中心、广州医科大学附属市一人 民医院、华南理工大学附属第二医 院） 地址 510000 广东省广州市越秀区人民北 路602号 申请人 华南师范大学 (72)发明人 舒博文　周小明　田甜　 (74)专利代理机构 广州骏思知识产权代理有限 公司 44425 代理人 李国钊 (51)Int.Cl. C12Q 1/70 (2006.01) 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图2页 (54)发明名称 基于微液滴数字分析的新型冠状病毒核酸 定量检测试剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种基于微液滴数字分析的 新型冠状病毒核酸定量检测试剂盒，其特征在 于，包括分别靶向靶向SARS‑CoV‑2 RNA的ORF1ab 基因6513‑6537nt的O‑crRNA和靶向靶向SARS‑ CoV‑2 RNA的N基因29214‑29238 nt的N‑crRNA， Cas13a蛋白，单链RNA报告探针和反应缓冲液。本 发明提供的检测方法无需反转录及核酸序列扩 增步骤，避免了样品损失、扩增偏差和核酸复制 产物可能造成的污染风险；操作步骤简单、无需 昂贵的热循环仪且检测时间不超过1小时；可实 现SARS‑CoV‑2 RNA单拷贝水平检测及绝对定量， A 无需内参校正和建立标准曲线。 5 9 1 3 1 8 2 1 1 N C CN 112813195 A 权　利　要　求　书 1/1页 1.一种基于微液滴数字分析的新型冠状病毒核酸定量检测试剂盒，其特征在于，包括 分别靶向靶向SARS‑CoV‑2RNA的ORF1ab基因6513‑6537nt的O‑crRNA和靶向靶向SARS‑CoV‑ 2RNA的N基因29214‑29238nt的N‑crRNA，Cas13a蛋白，单链RNA报告探针和反应缓冲液。 2.根据权利要求1所述的基于微液滴数字分析的新型冠状病毒核酸定量检测试剂盒， 其特征在于：所述O‑crRNA序列如SEQ  ID No.1所示，所述N‑crRNA序列如SEQ  ID No.2所示。 3.根据权利要求1所述的基于微液滴数字分析的新型冠状病毒核酸定量检测试剂盒， 其特征在于，所述反应缓冲液pH为8.9，包括以下组分：10mM Tris‑HCl、1.5mM MgCl 、50mM  2 KCl。 4.如权利要求1所述的基于微液滴数字分析的新型冠状病毒核酸定量检测试剂盒的使 用方法，其特征在于，包括以下步骤： S1准备样本：提取待测样本的核酸，得到核酸样本； S2配制反应体系：配制包含20nM Cas13a蛋白、100nM crRNAs、300nM单链RNA报告探针、 1×反应缓冲液和0.02％(v/v)RNase抑制剂的反应体系，其中反应缓冲液包含10mM Tris‑ HCl、1.5mM MgCl 、50mM KCl，pH 8.9； 2