制备重组新型冠状病毒Spike蛋白的方法发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 112375784 A (43)申请公布日 2021.02.19 (21)申请号 202110020323.7 (22)申请日 2021.01.07 (71)申请人 北京百普赛斯生物科技股份有限公 司 地址 100176 北京市大兴区北京经济技术 开发区宏达北路8号4幢4层 (72)发明人 秦丽丽　宋洁　王芳琪　 (74)专利代理机构 北京三友知识产权代理有限 公司 11127 代理人 张德斌　韩蕾 (51)Int.Cl. C12N 15/85 (2006.01) C12N 15/67 (2006.01) C07K 19/00 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) 权利要求书1页 说明书6页 序列表68页 附图2页 (54)发明名称 制备重组新型冠状病毒Spike蛋白的方法 (57)摘要 本发明提供了一种制备重组新型冠状病毒 Spike蛋白的方法。本发明首先提供以下多肽作 为信号肽在制备重组新型冠状病毒Spike蛋白中 的应用：SEQ  ID No.  10所示氨基酸序列组成的 多肽。本发明采用特定信号肽，构建含有编码重 组新型冠状病毒Spike蛋白的多核苷酸的表达载 体，转染哺乳动物细胞以分泌表达重组新型冠状 病毒Spike蛋白，可显著提高Spike蛋白在HEK293 细胞中的分泌表达水平。 A 4 8 7 5 7 3 2 1 1 N C CN 112375784 A 权　利　要　求　书 1/1 页 1.以下多肽作为信号肽在制备重组新型冠状病毒Spike蛋白中的应用： SEQ  ID No.  10所示氨基酸序列组成的多肽。 2.一种制备重组新型冠状病毒Spike蛋白的方法，该方法包括： 构建含有编码重组新型冠状病毒Spike蛋白的多核苷酸的表达载体，转染哺乳动物细 胞以分泌表达重组新型冠状病毒Spike蛋白； 其中，所述编码重组新型冠状病毒Spike蛋白的多核苷酸的核苷酸序列中包括了编码 信号肽的核苷酸序列，所述信号肽为：SEQ  ID No.  10所示氨基酸序列组成的多肽。 3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述编码重组新型冠状病毒Spike蛋白的多核苷 酸的核苷酸序列除包括编码信号肽的核苷酸序列外，还包括编码SEQ  ID No.  1所示氨基酸 序列的核苷酸序列。 4.根据权利要求2或3所述的方法，其中，所述编码重组新型冠状病毒Spike蛋白的多核 苷酸的核苷酸序列还包括：编码设计在重组新型冠状病毒Spike蛋白的C端的T4 fibritin 三聚体基序的核苷酸序列，所述T4 fibritin三聚体基序包括SEQ  ID No.  12所示氨基酸序 列； 其中，所述T4 fibritin三聚体基序的C端带有或不带有poly His标签。 5.根据权利要求2所述的方法，其中，所述编码重组新型冠状病毒Spike蛋白的多核苷 酸的核苷酸序列包括：编码SEQ  ID No. 22所示氨基酸序列的核苷酸序列。 6.根据权利要求2所述的方法，其中，编码重组新型冠状病毒Spike蛋白的多核苷酸的 核苷酸序列如SEQ  ID No. 32所示。 7.根据权利要求2所述的方法，其中，所述哺乳动物细胞为人胚肾293细胞。 8.根据权利要求2所述的方法，其还包括纯化所表达的重组新型冠状病毒Spike蛋白的 过程。 9.