一种新型冠状病毒的规模化纯化方法发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 113293147 A (43)申请公布日 2021.08.24 (21)申请号 202110119010.7 (22)申请日 2021.01.28 (71)申请人 上海青赛生物科技有限公司 地址 201507 上海市金山区金山工业区揽 工路1136号 申请人 北京赛尔富森生物科技有限公司 (72)发明人 安祺　田大勇　刘珍珍　 (74)专利代理机构 上海一平知识产权代理有限 公司 31266 代理人 贾军华　徐迅 (51)Int.Cl. C12N 7/02 (2006.01) A61K 39/215 (2006.01) A61P 31/14 (2006.01) 权利要求书1页 说明书10页 附图6页 (54)发明名称 一种新型冠状病毒的规模化纯化方法 (57)摘要 本发明提供了一种新型冠状病毒纯化方法 与应用。本发明采用蔗糖密度梯度离心技术可在 密度梯度离心纯化前不经浓缩直接进行密度梯 度离心纯化，因此，纯化方法步骤少，适应范围也 广，剪切力小，易收集完整的病毒颗粒，且纯化批 次间差异小，稳定性高，适合规模纯化新型冠状 病毒。 A 7 4 1 3 9 2 3 1 1 N C CN 113293147 A 权　利　要　求　书 1/1页 1.一种新型冠状病毒密度梯度离心纯化方法，其特征在于，所述方法包括步骤： (1)提供一离心转子，所述离心转子被配置为围绕所述离心转子的中心轴旋转离心，并 且所述离心转子设有用于容纳物料的内腔，所述内腔的体积为V0，在底部设有物料入口，顶 部设有物料出口； (2)通过所述物料入口，在所述离心转子的内腔中注入缓冲液，然后注入体积V1的60％ (wt％)蔗糖溶液； (3)对所述离心转子以T1进行离心，从而在所述离心转子的内腔形成蔗糖梯度溶液；其 中，T1为3000‑7000rpm； (4)以T2离心条件下，以流速F1，将含新型冠状病毒的物料从所述物料入口注入内腔， 其中，F1为120‑300ml/min；其中，T2为30000‑40000rpm； (5)当含新型冠状病毒的物料注入操作结束后，在离心条件下，以流速F2，将缓冲液从 所述物料入口注入内腔，从而使得新型冠状病毒富集于所述蔗糖梯度溶液中，形成富含新 型冠状病毒的梯度离心层； 其中，F2为120‑300ml/min，且F2/F1＝0.9‑1.1； (6)对所述离心转子的离心速度进行降速，从而使得转速为0rpm； (7)从所述离心转子的底部入口，收集所述富含新型冠状病毒的梯度离心层，从而获得 纯化的新型冠状病毒； 其中，所述V1/V0＝0.4‑0.6。 2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的离心转子的V0为3.2L。 3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(4)中，F1为150‑200ml/min。 4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(4)中，离心的转速T2为33000‑ 37000rpm。 5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(7)中，还包括步骤：对收集的经离心 的物料，进行紫外吸光值检测，从而确定所述的富含新型冠状病毒的梯度离心层(即病毒梯 度液)。 6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的含新型冠状病毒的物料是用包括以下 步骤的方法制备的： (W1)提供传代培养的Vero细胞； (W2)在所述的含新型冠状病毒的物料中接种新型冠状病毒，并进行病毒培养，从而获 得含新型冠状病毒的培养物；(W3)从所述培养物中，分离获得含新型冠