新型冠状病毒灭活疫苗中新型冠状病毒N蛋白含量的检测方法发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 112763628 A (43)申请公布日 2021.05.07 (21)申请号 202110052921.2 G01N 30/88 (2006.01) C07K 14/165 (2006.01) (22)申请日 2021.01.15 (71)申请人 北京生物制品研究所有限责任公司 地址 100176 北京市北京经济技术开发区 博兴二路9号院4号楼2层205室 (72)发明人 王辉　马昱　张雅博　赵玉秀　 于守智　张越　杨晓明　 (74)专利代理机构 北京三友知识产权代理有限 公司 11127 代理人 刘鑫　姚亮 (51)Int.Cl. G01N 30/02 (2006.01) G01N 30/06 (2006.01) G01N 30/54 (2006.01) G01N 30/72 (2006.01) 权利要求书2页 说明书9页 序列表2页 附图2页 (54)发明名称 新型冠状病毒灭活疫苗中新型冠状病毒N蛋 白含量的检测方法 (57)摘要 本发明提供新型冠状病毒灭活疫苗中新型 冠状病毒N蛋白含量的检测方法。该检测方法利 用了本发明的定量肽段(AYNVTQAFGR)；定量肽段 的定量离子对中母离子质荷比为563.7853，子离 子质荷比为679.3520和/或892.4640。利用该定 量肽段和定量离子对，通过高效液相色谱串联质 谱定量检测方法，N蛋白标准品制作标准曲线，将 待测新冠病毒疫苗孵育酶解后进行定量检测，得 到样品中定量肽段的子离子峰面积，进而计算得 到样品中新型冠状病毒N蛋白的含量。该方法检 测准确率高，精确度高，避免了疫苗样品中基质 A 效应等对检测的影响，能够用于新冠病毒灭活疫 8 苗各阶段中间产品及成品的新冠病毒N蛋白含量 2 6 3 检测。 6 7 2 1 1 N C CN 112763628 A 权　利　要　求　书 1/2 页 1.一种用于液相色谱串联质谱定量检测新型冠状病毒N蛋白的定量肽段，其氨基酸序 列如下： AYNVTQAFGR(SEQ  ID NO：1)。 2.根据权利要求1所述的定量肽段，其中，所述定量肽段的定量离子对中母离子的质荷 比为563.7853，子离子的质荷比为679.3520和/或892.4640。 3.权利要求1或2所述定量肽段在液相色谱串联质谱定量检测新型冠状病毒N蛋白中的 应用。 4.一种新型冠状病毒灭活疫苗中新型冠状病毒N蛋白含量的检测方法，其包括以下步 骤： 对重组新型冠状病毒SARS‑CoV‑2的N蛋白标准品进行孵育并进行酶解处理；采用高效 液相色谱串联三重四级杆质谱分析检测设备，进样酶解处理后的重组新型冠状病毒SARS‑ CoV‑2的N蛋白标准品，以标准品含量为横坐标，以权利要求1或2所述的定量肽段的子离子 峰面积为纵坐标绘制标准曲线； 取待测新型冠状病毒SARS‑CoV‑2的灭活疫苗样品进行孵育并进行酶解处理；将酶解后 的上清液进样检测，根据所述定量肽段的子离子峰面积，基于标准曲线和进样体积获得待 测的灭活疫苗样品中新型冠状病毒SARS‑CoV‑2的定量肽段的含量，除以进样体积，即得到 待测的灭活疫苗样品中新型冠状病毒N蛋白的浓度。 5.根据权利要求4所述的检测方法，其中，重组新型冠状病