一种表达人源ACE2的动物模型及其用途发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 112680466 A (43)申请公布日 2021.04.20 (21)申请号 202110080692.5 C12N 7/01 (2006.01) A01K 67/027 (2006.01) (22)申请日 2021.01.21 A61K 49/00 (2006.01) (71)申请人 广州派真生物技术有限公司 地址 510663 广东省广州市高新技术产业 开发区科学城揽月路3号广州国际企 业孵化器G区G304房 申请人 广东省实验动物监测所 (72)发明人 周泽鑫　李华鹏　张钰　张超　 王薇薇　李舸　 (74)专利代理机构 广州市华学知识产权代理有 限公司 44245 代理人 郭炜绵 (51)Int.Cl. C12N 15/55 (2006.01) C12N 15/864 (2006.01) 权利要求书1页 说明书4页 序列表4页 附图5页 (54)发明名称 一种表达人源ACE2的动物模型及其用途 (57)摘要 本发明公开了一种表达人源ACE2的动物模 型及其用途，本发明将小鼠AC E2基因信号肽序 列和人源ACE2基因成熟肽序列合并并经过密码 子优化，扩增得到hACE2序列，并进一步制得重组 腺相关病毒AAV‑hACE2；小鼠肺部插管喷射重组 腺相关病毒AAV‑hACE2，至少2周之后，获得肺和 脑组织高表达人源ACE2的小鼠模型。本发明在构 建新型冠状肺炎病毒易感小鼠模型的建模速度 上比较快，只需要两周即可建模成功。本发明充 分揭示了AAV‑hACE2小鼠在感染新型冠病毒后的 病理特征，和在新型冠状病毒疫苗上的应用，从 而明确了该模型适用于新型冠状病毒疫苗药效 A 学评价。 6 6 4 0 8 6 2 1 1 N C CN 112680466 A 权　利　要　求　书 1/1页 1.一种表达人源ACE2的动物模型，其特征在于是由以下步骤制得： (1)将小鼠ACE2基因信号肽序列和人源ACE2基因成熟肽序列合并并经过密码子优化， 然后进一步合成克隆载体；设计引物，以克隆载体为模板扩增hACE2序列； (2)酶切腺相关病毒载体，获取线性化载体骨架，然后与hACE2序列进行同源重组反应， 经转化大肠杆菌获得目的基因骨架表达载体pAAV‑hACE2； (3)辅助性质粒pHelper、血清型质粒pRep2Cap9、目的基因骨架表达载体pAAV‑hACE2三 质粒共转染293T细胞，并通过梯度密度超速离心纯化制备，获取重组腺相关病毒AAV‑ hACE2； (4)小鼠肺部插管喷射重组腺相关病毒AAV‑hACE2，至少2周之后，获得肺和脑组织高表 达人源ACE2的小鼠模型。 2.根据权利要求1所述的表达人源ACE2的动物模型，其特征在于：步骤(4)中，肺部插管 10 喷射的注射量为100μL，重组腺相关病毒AAV‑hACE2的浓度为1×10 vg/μL。 3.根据权利要求1所述的表达人源ACE2的动物模型，其特征在于：步骤(1)所述引物的 序列如SEQ.ID.NO.