槐花中黄酮类化合物提取、分离和鉴定.docxVIP

精品文档 精品文档 随意编辑 随意编辑 槐花中黄酮类化合物分离和鉴定 [ 适用对象 ] 中药国际交流、中药知识产权、中药制药工程、中药资源专业 [ 实验学时 ] 9 一、实验目的要求 学习黄酮类化合物的提取、分离和检识，通过实验要求： （ 1 ）了解沸水提取黄酮类化合物的原理和操作。 （ 2 ）了解由芸香苷水解制取槲皮素的方法。 （ 3 ）掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮苷、苷元和糖部分的检识 方法 。 二、实验原理 由槐花中提取芸香苷的方法很多，本实验是根据芸香苷在冷水 和热水中的溶解度差异的特性进行提取和精制。 纸色谱的分离原理是 利用各种化合物在流动相和固定相中分配系数的不同而达到分离目 的。 三、仪器设备 烘箱、 水浴锅、 铁架台，烧杯， 三角烧瓶，滤纸，试管，层析槽， 毛细管等。 四、相关知识点 槐花为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花及花蕾，主要 含芸香苷（芦丁） ，含量高达 12~20% ，水解生成槲皮素、葡萄糖及 鼠李糖。 芸香甘（rutoside ）,分子式C27 H30 O16,分子量610.51 ,淡黄 色针状结晶，mp.177~178 C。难溶于冷水（1 ： 8000 ）,略溶于热 水（1 ： 200）,溶于热甲醇（1：7）,冷甲醇（1 ： 100）,热乙醇（1 ：30）,冷乙醇（1 ： 650）,难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯 仿、乙醍、石油醍等，易溶于毗咤及稀碱液中。 榔皮素（quercetin ）,分子式C15 H10。7,分子量302.23 ,黄 色针状结晶，mp.314 C （分解）。溶于热乙醇（1 ： 23）,冷乙醇（1 ：300 ）,可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、冰醋酸、毗咤等，不溶于 石油醍、苯、氯仿、乙醍中，几不溶于水。 OH HOY^YO^pCoH VAr一 OH O 芸香昔R=-葡萄糖-鼠李糖 棚皮素 R= H 五、实验步骤 （一）芸香甘、榔皮素和糖的纸色谱鉴定 1、点样：取新华一号色谱滤纸，规格 20 cm X20 cm ,在滤纸 下端约2 cm处用铅笔画一直线，间隔2 cm分别点上下列样品或标 准溶液: （1）糖样品溶液 （1）糖样品溶液 （3）标准鼠李糖溶液 （5）芸香甘标准品溶液 （7）棚皮素标准品溶液 （2）标准葡萄糖溶液 （4）芸香甘样品甲醇溶液 （6）棚皮素样品甲醇溶液 2、展开剂：正丁醇-醋酸-水（4：1：5）上层上行展开 3 、显色：展开完毕，将滤纸取出，记录溶剂前沿位置。待溶剂 挥尽后，在（ 3 ）与（ 4 ）点之间剪开，分别显色。 （ 1 ）糖的显色：喷苯胺 - 邻苯二甲酸试剂，在 105 ℃烘 10 分 钟，显棕色斑点。计算并比较样品和标准品的 Rf 值。 （ 2 ）黄酮化合物的显色： ①可见光下观察色斑，紫外灯下观察荧光斑点。 ②经氨气薰后再观察。 ③待氨气挥尽后，喷1% A1C13甲醇溶液，再观察。 ④计算并比较样品与标准品的 Rf 值。 （二）芸香苷和槲皮素性质试验 、酸性试验：取小试管 8 支，每 4 支一组，第一组每管中加入 芸香苷 1mg ，第二组每管中加入槲皮素 1mg ，每组四管中分别加入 稀氨水、 5% 碳酸氢钠水溶液、 5%碳酸钠水溶液、 1%氢氧化钠水溶 液各 2 ml ，振摇后观察各管溶解情况。溶解的溶液应呈黄色。再加 浓盐酸数滴酸化，黄色褪去或变浅，并有沉淀析出或产生混浊。 、 Molish 反应：取试样 1 mg 置小试管中，加乙醇 0.5 ml 溶 解，加”茶酚试剂1?2滴，摇匀。倾斜试管，沿管壁徐徐注入浓硫 酸约 0.5 ml 静置。观察两层溶液的界面变化，出现紫色环者为阳性， 表示样品分子中含有糖的结构（糖和苷类均呈阳性反应） ，比较芸香 苷和槲皮素的不同。 、 Fehling 试验：取试样数 mg ，溶于 0.5 ml 热水中，加斐林 氏试剂甲、乙等量混合液 2 ml ，沸水浴上加热，如产生氧化亚铜的 暗红色或黄色沉淀表示有还原糖或其它还原性物质。 充分加热作用后 滤去沉淀， 滤液滴加浓盐酸酸化， 在水浴上加热水解， 水解液以 10% NaOH 中和，再进行斐林氏试验，此时显阳性反应者表示样品为糖 苷化合物。比较芸香苷和槲皮素的不同。 4、盐酸 -镁粉反应：取芸香苷 1 mg ，加乙醇 2 ml ，在水浴上加 热溶解，加镁粉约 50 mg ，滴加数滴浓盐酸，溶液由黄色渐变红色 者表示有黄酮类化合物。以同法试验槲皮素。 如用锌粉代替镁粉，则芸香苷（ 3-羟基与糖结合成苷）仍有作 用，而槲皮素（黄酮醇类）不呈还原显色反应。因此可区别两者。 5、 锆-柠檬酸反应： 取样品 1 mg ， 加甲醇 2 ml ， 在水浴上加热溶解， 再加 2%二氯氧锆甲醇溶液 3~4 滴，凡有 3-羟基或 5- 羟基的黄酮即