备课(第3节遗传密码的破译(选学)).pdfVIP

●备课资料 尼伦伯格的后续实验 （1）按比例加入２种核苷混合的多聚物 由于当时还未分离 RNApol 酶，无法按设计的模板来合成 RNA ，但除了 UUU ，CCC ， AAA ，GGG 以外，还必须破译其他的密码， Nirenberg 又想出了一种新的方法，就是按一定 的碱基比例来合成 RNA 。比如在底物中加 5 份的 UDP 和 1 份的 GDP ，碱基比为 U ∶G ＝5 ∶1， 它们能组成的三联体不外乎 8 种： UUU ，UUG ，UGU ，GUU ，GGG ，GGU ，GUG ，UGG 。 U 和 G 将随机地加入到三联体中，这样按比例各个位子上进入 U 和 G 的概率不同，如 UUU ∶UGG ＝（ 5×5 ×5 ）∶（ 5 ×1×1）＝ 25 ∶1；同理 UUU ∶UUG ＝5 ∶1，根据这样的 推测，在无细胞系统中以这种比例合成的 mRNA 产生的氨基酸的比例也应是相应的，这样 可以推测出密码子的组成。如氨基酸测定结果： 苯丙氨酸（ UUU ）∶半胱氨酸（ UGU ）＝ 5 ∶1 苯丙氨酸（ UUU ）∶缬氨酸（ GUU ）＝5 ∶5 苯丙氨酸（ UUU ）∶甘氨酸（ GUU ）＝24 ∶1 苯丙氨酸的密码子是已知的，由 3 个 U 组成，那么半胱氨酸一定是由 2 个 U ， 1 个 G 组成；缬氨酸同样如此； 甘氨酸应是由一个 U 两个 G 组成。S.Ochoa 及其合作者获悉 Nirenberg 用 polyU 大获成功之后， 利用身边保存着多种多聚核苷酸也开展了破译密码的研究， 采用的 方法也是加入不同比例的混合多核苷酸两组展开了激烈的竞争，经过两个组一年多的努力， 结果搞清了各种氨基酸的碱基组成，但是并不知其顺序。 Nirenberg 于 1964 年又采用三联体 结合实验，一举破译了所有密码，取得了重大的突破。 （2 ）三联体结合实验 从上面的实验结果不难看出，按比例合成 RNA 的方法不能解决最关键的顺序问题，此 时擅长 RNA 合成的 Khorara 就担负起直接合成有序多核苷酸的难题， 1964 年，正当 Khorara 刚刚奋力完成了第一批排列的核糖多核苷酸时， Nirenberg 又有新的突破，使破译密码的艰 难工作迅速达到了光辉的顶点， 这种新的突破就是建立了三联体结合的新方法。 这个方法的 思路是建立在两项基础上的：① tRNA 和氨基酸及三联体的结合是特异的。②上述结合的复 合体大分子是不能通过硝酸纤维滤膜的微孔，而 tRNA －氨基酸的复合体是可以通过的。 Nirenberg 采用了一把钥匙开一把锁的思路，进行破译密码。他们首先发现当简单的特 定的核苷酸加入到 E.coli 的核糖体上时， 它们并不促使蛋白质的合成， 而引起了特定的 tRNA 及其携带的氨基酸结合到核糖体上， 形成大的复合体。 因此他们每次在无细胞系统中仅加一 种已知顺序的三联体 RNA （如ACA ），同时在氨基酸中只用 14 C 标记一种氨基酸（如 Ser）， 若 ACA 进入核糖体后，与其结合 tRNA 上携带的不是所标记的 Ser，那么 tRNASer 和其携 带的 Ser 就会从 NC 上透过，所以通过测定透过 NC 的 tRNA －aa 复合体是否带有标记，如 带有标记就可以确