基因工程的基本步骤.pdfVIP

基因工程的基本步骤： 1、提取目的基因 ——将需要的基因从供体生物的细胞内提取出来。 目的基因获取方法：①鸟枪法②分子杂交法③逆转录法 ④人工合成法 提取目的基因 目前被较广泛提取使用的目的基因有： 苏云金杆菌抗虫基因、 人胰岛素基因、 人干扰素基因、 种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。 2 、目的基因与运载体结合 用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切 口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后， 在 DNA连接酶的作用下连接 形成重组 DNA分子 步骤：（ 1）用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个有粘性末端的切口。 （2）用同种限制酶切断目的基因，产生相同的粘性末端。 （3）将切下的目的基因片段，插入到质粒的切口处，再加入适量的 DNA连接酶，使 质粒与目的基因结合成重组质粒 目的基因与运载体结合 3、将目的基因导入受体细胞 ①导入方法：借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 ②导入过程：运载体为质粒，受体细胞为细菌，一般是将细菌用 CaCl2 处理，以增大 细菌细胞壁的通透性，使含有目的 基因的重组质粒进入受体细胞。 目的基因导入 4 、目的基因的检测和表达 前三步的处理十分繁锁， 为保证目的基因得到有效利用， 通常用大量的受体细胞来接受 不多的目的基因。 这样， 处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少， 必须将它从中检测 出来。