高效液相色谱和气相色谱的异同点.docx

. 高效液相色谱和气相色谱的异同点 不同点： 一、流动相不同： HPLC 为液体流动相， GC 为永久性气体作流动相（通常叫做 载气） 二、进样器不同：高效液相为平头进样针，气相色谱为尖头进样针 三、色谱柱长不同： （ 1）气相色谱柱通常几米到几十米 （气相色谱由于载气的相对分析量较低，分子间隙大，故粘度低，流动性好，组 分在气相中流动速度快，因此可以增加柱长，以提高柱效）。 （2）液相色谱柱通常为几十到几百毫米 四、分析种类有差异： 气相色谱分析的对象多为（不适绝对）：分子质量小于 1000 ，低沸点，易挥发， 热稳定性好的化合物。 液相色谱：更适用于分析高沸点，难挥发，热稳定性差，分子质量较大（ 1000 - -2000 ）的液体化合物。 五：样品柱前变化不同：气相色谱的样品在柱前必须变为气体（气化室汽化）， 而液相色谱的样品在柱前则无变化。 六、所用检测器有差异： 液相主要为：紫外检测器，荧光检测器、示差折光检测器 ..... 气相色谱主要为：氢火焰离子化检测器（ FID） , 热导检测器（ TCD） , 电子捕获 检测器（ ECD） ,火焰光度检测器（ FPD） ,氮磷检测器（ NPD） ..... 相同点：基本原理相同。 都是利用物质在流动相和固定相中的分配系数的差别，从而在两相间反复多次 （次，甚至更多）的分配，使原来分配系数差别很小的各组分分离开来。 ? Owen 发现异卵双生牛的天然免疫耐受现象 (1945) ，明确自身识别问题， 伯耐特 (Burnet ， 1949) 提出免疫耐受理论，梅德华 (Medawar ， 1953) 实 验证实胚胎期耐受理论。耶那 (Jerne ， 1955) 提出天然抗体选择学说，完 成免疫网络学说 (1974)， 伯耐特等 (Burnet Talmage, 1957) 完善克隆选 择学说等 免疫防御 (immunologic defense) 免疫稳定 (immunologic . 抗感染 消除炎症或衰老细胞 . homeostasis) 免疫监视 (immunologic 控制癌变细胞 surveilance) 1．高压：液相色谱法以液体为流动相（称 为载液），液体流经色谱柱，受到阻力较 大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液 施加高压。一般可达 150 ～ 3.5 万 KPa。 2. 高速： 流动相在柱内的流速较经典 色谱快得多，一般可达 1～ 10ml/min 。高 效液相色谱法所需的分析时间较之经典液 相色谱法少得多，一般少于 1h 。 3. 高效：近来研究出许多新型固定 相，使分离效率大大提高。 4. 高灵敏度：高效液相色谱已广泛采 用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析 的灵敏度。如 荧光检测器 灵敏度可达 10-11g 。另外，用样量小，一般几个微升。 5. 适应范围宽：气相色谱法与高效液 相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离 能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方 . . 便等优点，但是受技术条件的限制，沸点 太高的物质或热稳定性差的物质都难于应 用气相色谱法进行分析。而高效液相色谱 法，只要求试样能制成溶液，而不需要气 化，因此不受试样挥发性的限制。对于高 沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于 400 以上）的有机物（这些物质几乎占有 机物总数的 75% ～ 80% ）原则上都可应 用高效液相色谱法来进行分离、 分析。 据 统计，在已知化合物中，能用气相色谱分 析的约占 20%，而能用液相色谱分析的约 占 70 ～80%。 高效液相色谱按其固定相的性质可分 为高效凝胶色谱、疏水性高效液相色谱、 反相高效液相色谱、高效离子交换液相色 谱、高效亲和液相色谱以及高效聚焦液相 色谱等类型。用不同类型的高效液相色谱 分离或分析各种化合物的原理基本上与相 对应的普通液相 层析 的原理相似。其不同 之处是高效液相色谱灵敏、快速、分辨率 高、重复性好，且须在色谱仪中进行。 . . 编辑本段 主要类型及其分离原理 根据分离机制的不同，高效液相色谱 法可分为下述几种主要类型： 1 ．液 — 液分配色谱法 (Liquid-liquid Partition Chromatography) 及化学键合相色谱 (Chemically Bonded Phase Chromatography) 流动相和固定相都是液体。流动相与 固