2019-nCoV双靶点抗体检测微球复合体组合、制备方法、试剂盒及试剂盒使用方法发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 111896734 A (43)申请公布日 2020.11.06 (21)申请号 202010478955.3 (22)申请日 2020.05.29 (71)申请人 湖北新纵科病毒疾病工程技术有限 公司 地址 430000 湖北省武汉市东湖新技术开 发区高新大道818号高科医疗器械园 B21栋4层1-2号 (72)发明人 王华林　张涛　易辉　王万朝　 (74)专利代理机构 武汉智嘉联合知识产权代理 事务所(普通合伙) 42231 代理人 易贤卫 (51)Int.Cl. G01N 33/569 (2006.01) G01N 33/533 (2006.01) G01N 33/543 (2006.01) 权利要求书2页 说明书9页 序列表5页 附图5页 (54)发明名称 2019-nCoV双靶点抗体检测微球复合体组 合、制备方法、试剂盒及试剂盒使用方法 (57)摘要 本发明涉及病毒检测技术领域，具体公开了 一种新型冠状病毒2019‑nCoV双靶点抗体检测微 球复合体组合、制备方法、试剂盒及试剂盒使用 方法。其中使用了偶联抗原的微球复合体组合， 偶联抗原包括新型冠状病毒2019‑nCoV的S蛋白 和新型冠状病毒2019‑nCoV的N蛋白，所述S蛋白 的氨基酸序列如SEQ NO:1所示，所述N蛋白的氨 基酸序列如SEQ NO:2所示。制备的微球复合体组 合能够对S抗体和N抗体进行双靶点检测，充分反 映新型冠状病毒(2019‑nCoV)两种主要抗原刺激 机体产生特异性抗体的效果。 A 4 3 7 6 9 8 1 1 1 N C CN 111896734 A 权　利　要　求　书 1/2 页 1.一种新型冠状病毒2019-nCoV双靶点抗体检测的微球复合体组合，其特征在于，包括 S微球复合体和N微球复合体，所述S微球复合体为偶联有新型冠状病毒2019-nCoV的S蛋白 的荧光微球，所述N微球复合体为偶联有新型冠状病毒2019-nCoV的N蛋白的荧光微球，所述 S蛋白的氨基酸序列如SEQ NO:1所示，所述N蛋白的氨基酸序列如SEQ NO:2所示。 2.根据权利要求1所述的微球复合体组合，其特征在于，所述荧光微球为聚苯乙烯微 球、乳胶微球或磁性微球。 3.一种新型冠状病毒2019-nCoV双靶点抗体检测的微球复合体组合的制备方法，其特 征在于，包括以下步骤： S1：利用基因工程手段克隆得到2019-nCoV的S蛋白和2019-nCoV的N蛋白； S2：采用两步酰胺反应法分别将S蛋白和N蛋白与各自对应的荧光微球进行偶联。 4.根据权利要求3所述的微球复合体组合的制备方法，其特征在于，所述S1步骤中S蛋 白的制备方法为： S110：得到如核苷酸序列SEQ NO:3所示的S基因； S111：将S基因连接入pET32a(+)的BamH  I位点和Hind  III位点之间，N端加入ATG标签， C端加6 ×his-tag标签和TAG标签，连接后转入大肠杆菌DH5a中扩增，提取后得到重组质粒 pET32a(+)S； S112：将重组质粒pET32a(+)S转化至BL21(DE3)大肠杆菌中表达； S113：收集菌体，调节pH8.0，超声破碎，离心取上清用镍柱纯化，即可得到所述S蛋白。 5.根据权利要求3所述的微球复合体组合的制备方法，其特征在于，所述S1步骤中N