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排阻色谱 亲和色谱 第三十页，共76页 （一）DHPLC的基本原理 DHPLC的分离系统 DHPLC分离DNA的原理 DHPLC检测突变的原理 DHPLC 第三十一页，共76页 1. DHPLC的分离系统 DHPLC 1. 色谱柱的填料 特性：电中性，疏水性 固定相: C18 基 质： 聚苯乙烯-二乙烯基苯（PS-DVB) 2. 离子对试剂：三乙基铵醋酸盐（TEAA） 特性：带正电荷，疏水性 3. 流动相：乙腈 特性：通过改变浓度，将DNA分子按结合程度的不同，逐步洗脱下来。 第三十二页，共76页 PO3- TEAA C18 2. DHPLC分离DNA的原理 DHPLC 第三十三页，共76页 DHPLC 3. DHPLC检测突变的原理 变性后，缓慢退火 分离手段： 非变性分离 部分变性分离 完全变性分离 第三十四页，共76页 （二）临床应用 乳腺癌相关基因BRCA1、BRCA2及ATM等疾病相关基因的分子检测； 短的串联重复序列的基因分型； 肿瘤样本中杂合性缺失的检测； Y染色体和常染色体DNA序列的筛查 酵母、拟南芥、果蝇及小鼠的基因组作图及基因克隆。 DHPLC 第三十五页，共76页 （三）方法学评价 优点：具有更高的准确性和敏感度。 DHPLC