磁珠纯化的原理.ppt

磁珠纯化的原理 胶回收—玻璃奶法 玻璃奶的制作 1.石英砂磨成325目的玻璃粉（研磨2小时左右）;粉末颗粒的大小，指的是粉末可以通过325目的筛网 2. 50克玻璃粉悬于加有200mL蒸馏水的烧杯中,搅拌混匀后,静置90min; 3.将上清转移至离心管中6000g离心10min; 4.倒掉上清,将玻璃粉重悬于1.5mL 25%的硝酸中,室温放置过夜; （新购置的玻璃器皿含有较多的游离碱，需要在酸中浸泡数小时，浸泡后再冲洗干净） 5. 6000g离心10min,沉淀玻璃粉; 6.倒掉上清,将玻璃粉用无菌双蒸水洗涤4-6次,直至pH值中性; 7. 用无菌双蒸水重悬玻璃粉,配成50%匀浆; 8.等分成100μl样品, 贮存于-70℃;待用的样品可贮存于-20℃或4℃. 切取目的DNA条带 溶胶 结合玻璃奶 离心沉淀玻璃奶 洗脱DNA 漂洗玻璃奶 操作步骤 原理 玻璃奶(Glassmilk) 是一种白色硅颗粒，能结合0.2kb至50kb大小的DNA（双链、单链、线性、环状或超螺旋）。 DNA与玻璃奶结合原理 在高盐状态下，玻璃奶周围的负电荷被打破，并允许DNA的磷酸负电荷与玻璃奶特异性结合。在低盐（H2O或1×TE）时溶解分离。 盐浓度 DNA100bp:高盐状态下结合率高。 DNA100bp:低盐状态下结合率高。 pH值 pH7.0:结合率高