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实验八 革兰氏染色法 实验八 革兰氏染色法 实验八 革兰氏染色法 （参考实验教材第9页） 了解革兰氏染色的原理，学习并掌握革兰氏染色的方法。 土壤中的微生物，革兰氏染色液（草酸铵结晶紫、碘液、95％酒精、番红），载玻片，接种环，无菌水，显微镜，香柏油，二甲苯，擦镜纸。 按无菌操作要求，在酒精灯火焰旁进行 在洁净干燥的载玻片边缘滴一滴无菌水，用接种环取少量菌体与水滴充分混匀；涂在玻片中央，形成薄而均匀的菌膜； 2.干燥：于空气中自然干燥 3.固定：将玻片通过火焰1—2次以使菌膜牢固附着在玻片上； （1）初染：在菌膜上加草酸铵结晶紫一滴，约1分钟，水洗； （2）媒染：在菌膜上滴加碘液一滴，约1分钟，水洗； （3）脱色：将载玻片上面的水甩净，用95％酒精滴洗菌膜至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约30秒钟，立即用水冲净酒精； （4）复染：用番红液染1分钟，水洗。 5.干燥：将载玻片上的水吸干或于空气中自然干燥 6.镜检：将载玻片置于显微镜载物台上，按低倍镜—中倍镜—高倍镜---油镜的顺序观察。 革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。 实验完毕后的处理： ①先用擦镜纸将油镜头上的油擦去；用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2—3次；再用干净的擦镜纸将镜头擦2—3次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。 ②用废纸将载玻片上的香柏油擦干净，再用沾少许二甲苯的纸将载玻片擦干净后放入有洗液的盆中浸泡。 1．结果：绘出你所观察到的细菌的形态图，并说明它们是革兰氏阴性菌还是革兰氏阳性菌。 2．思考题：从初染到复染的过程中，染色成败的关键是哪一步？