细胞因子检测资料.pdfVIP

. - 细胞因子检测 细胞因子是由免疫细胞和某些非免疫细胞经刺激而合成、 分泌的一类生物活性物 质分泌的蛋白质 ,在体广泛参与免疫调节及炎症反响、组织修复、刺激造血系统、 刺激细胞的增殖与凋亡等重要生理活动 ,?在抵抗外来病原及维持机体环境平衡 中均起重要作用。某些刺激因子也可导致一些细胞因子超量表达 ,或表达减少 ,从 而参与疾病的发病及病理过程。 1、免疫学检测法其根本原理是将细胞因子作为抗原进展定量检测。如免疫斑点 法、 ELISA 法、 RIA 法和免疫印迹法等均已用于细胞因子的检测。 2.、生物学测定法其原理是根据细胞因子对特定的依赖性细胞株 (即靶细胞 )?的促 增殖作用 ,以增殖细胞中的 DNA 的合成或酶活性为指标 ,间接推算出细胞因子的 活性单位 ,如对 IL-1 、IL-2 等细胞因子活性的检测。亦可根据某些细胞因子对特 定靶细胞的杀伤效应或对病毒的抑制作用进展测定 ,如对肿瘤坏死因子及干扰素 的生物活性测定。 3、分子生物学测定法目前采用的技术有各种印迹法、 斑点杂交、原位杂交和 PCR 等。通过检测细胞细胞因子的基因组成或 mRNA 量 ,推算出细胞因子的合成量。 一、 IL-1 的检测 (生物活性测定 ) . . word.zl- . - 产生 IL-1 的细胞种类很多 ,其中最主要的为单核 - 巨噬细胞。 IL-1 可分为 IL-1 α(? 也称酸性 IL-1,pI=5.0)和 IL-1 β(中性 IL-1,pI=7.0) 。两者的分子量和生物活性相似 ,? 只能用抗体检测方法才能区别 ,常用的生物学测定法对两者都适用。 IL-1?的生物 学活性广泛 ,其检测方法亦较多 ,包括有小鼠胸腺细胞增殖法、 D10G 4.1细胞增殖 法及 L929 细胞增殖法等。 IL-1 反响细胞增殖可以通过活性染料染色 ,显微镜直接 计数 ,3H-TdR 或 125I-UdR 的 DNA 掺入量或以活性细胞代率为指标来表示。 本试 验介绍 L929细胞增殖 MTT 比色法。 〔一〕IL-1 的诱生 体外试验可用 LPS 等有丝分裂原诱导单核 -巨噬细胞产生 IL-1,或用 P388D1(鼠),THP-1(人)细胞株制备 IL-1 。本试验以小鼠巨噬细胞制备 IL-1 。 1、取 6～ 10周龄 BALB/c 或 C57BL/6 小鼠 ,雌雄均可 ,拉颈处死后用酒精消毒。 2、用带 9 号针头的 5ml 注射器腹腔注入 5ml 冷的含 5 ％小牛血清的 Hanks液 (5?％ ?NBS-HBSS),轻揉腹部吸出腹腔液体 (含腹腔细胞 ),反复抽吸几次。 3、1500r/min 离心 8min,洗细胞 2 次。 4、将腹腔细胞用含 10％小牛血清的 RPMI-1640液 (10％NBS-RPMI-1640)配成 2 × 106/ml,加到 24 孔平底培养板 ,1ml/