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肽含量检测方法一三氯乙酸沉淀法（TCA-NSI） （可溶解小分子含氮物质定量测定） 检测项目 检测方法 氯 乙 酸 氮 溶 指 数 的 测 定 -. 仪器设备 1.实验室用样品粉碎机或研钵 2.分析筛：孔径0.45mm （40 @ ） 3.分析天平：感S 0.000lg 4.消煮炉或电炉 5.滴泄管：酸式，10、25mL 6.消煮管：250mLa 7.凯氏烧瓶：250mL 8.离心管 凯氏蒸憾装置：半微量凯氏定氮装苣 锥形瓶：150、250mL 11.容捲瓶：100mL 烧杯:250 mL 台式离心机：定时，调速，转速可达4000转/分 普通磁力搅拌器 15.移液管：25 mL 称样皿： 电热式恒温烘箱：可控制温度为105±2 °C 二.试剂 硫酸：化学纯，含量为98%,无氮： 混合催化剂：0.4g五水硫酸铜，6g硫酸钾，均为化学纯，磨碎混匀： 氢氧化钠：化学纯，40%水溶液（m/V）； 硼酸（GB628）：化学纯，4%水溶液（m/V）： 混合指示剂：甲基红0.1 %乙醇溶液，浪甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体 积混合： 盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标能，按GB 601制备： 盐酸标准溶液：C （HCI） =0.02mol/Lo 1.67mL盐酸（GB622,分析纯）， 注入1000mL蒸憾水中 硫酸彼：分析纯，干燥： 三氯乙酸：分析纯，10%水溶液（m/V）。 蔗糖（HG3-1001）：分析纯  三.操作方法 1.取称样皿一只，250mL烧杯一只，离心试管六只，洗净后置于烘箱中备用。 三 2.粉碎研磨，全部过40目筛，取筛下物约5克置于称样皿中，在105°C的温度下 氯 烘干3h,取出,盖好称样皿盖，在干燥器中冷却30min,称重。再同样烘干lh,冷 乙 却，称重，直至两次重量之差小于0.002g为恒重。 酸 3.称取恒重后的样品g克（注：样品约2至3克），置于烧杯中，加蒸憾水75mL, 氮 室温下电磁搅拌45分钟。将烧杯中溶液及沉淀摇匀，折入离心试管中，离心后 溶 收集上淸液（1号上淸液）。 指 注：离心转速2500转/分钟，离心时间10分钟。 数 4.取1号上淸夜25mL,加入25mL10%的三氯乙酸溶液，混合后静置20分钟。将烧 的 杯中溶液及沉淀摇匀，折入离心试管中，离心后收集上淸液（2号上淸液）。 测 注：离心转速4000转/分钟，离心时间20分钟。 定 5.取2号上淸液25mL,小心移入干燥的500mL凯氏烧瓶中，加入混合催化剂6.4g, 再加入12mL浓硫酸和数粒玻璃珠，摇匀，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小 火，待样品焦化、泡沫消失后，再加强火力，直至呈透明的蓝绿色，然后继续加 热，至少2h.°待试样消煮液冷却，加入20mL蒸馅水，转人lOOmL容虽瓶中， 冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。安装好半微量蒸馅装宜后，向 接收瓶内加入20mL硼酸吸收液及2滴混合指示剂，并使冷凝管下端插入吸收液 内，蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸锚过程中保持 此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液注人蒸餾装置的反 应室中，用少量蒸憾水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氢氧化钠溶 液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加入密封，防 止漏气。蒸5min降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馆lmin,用熬 馀水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸佛。 6.蒸馅后的吸收液立即用0.02mol/L盐酸标准溶液滴左，溶液由蓝绿色变成灰红 色为终点。得消耗盐酸标液W （mL）,滴定的结果用空白实验校正。 7.另称取样品m?克（约0.5至1克），用步骤5相同的方法左氮，得消耗盐酸标 液V2 （mL）,滴泄的结果用空白实验校正。 *0  氯 乙 酸 氮 溶 指 数 的 测 定 四.计算公式 三氯乙酸氮溶指数(TCA-NSI)按式(1)计算： TCA-NSI (%) = ((VrV0) Xm2X75) / ((V2-Vo) XmiX12.5) X 100 ……(1) 式中：测定可溶性氮时称取的试样质量，g； m2--测定总氮时称取的试样质量，g； Vl-空白试验消耗的盐酸标准滴定溶液体积，mL: Vl-测泄可溶性氮时消耗的盐酸标准滴定溶液体积，mL; V2…测定总氮时消耗的盐酸标准滴定溶液体积，mL; 允许误差 每个试样取两平行样进行测立，以算术平均值为结果。两次平行测圧结果绝 对差值不大于3%。 备注 产品检测前提条件：不含非蛋口氮、游离氨基酸《3%。得到三氯乙酸氮 溶指数才精确。 质量部 技术总监 总经理 关于富力肽中小肽含量的确定: 1. 1检测方法：三氯乙酸氮溶指数(TCA—NSI) 1. 2原理： 三氯乙酸是一种蛋白质沉淀剂，它可以沉定蛋白质和较长