动物细胞与组织培养.pptVIP

6、传代培养技术 传代的理想时期：对数生长期，细胞80~90%或刚刚全部汇合。 方法： ①消化：加入胰蛋白酶或胰蛋白酶与EDTA混合液，盖满瓶底，作用2~5min； ②检查：如细胞间隙变大，细胞质回缩，则终止消化。 ③终止消化：吸出消化液；加入Hanks液，轻轻转动，洗去残留的消化液。如单用胰蛋白酶，可直接加入培养液。 ③细胞计数：用吸管轻轻吹打瓶壁，使细胞脱落，制成悬液，计数并记录其浓度； ④重新稀释接种培养。 第六十三页，共98页 根据细胞特点，掌握细胞消化时间和选择消化方法。 第六十四页，共98页 7、贴壁技术 贴壁培养的材料与系统 （1）主要材料： 玻璃 塑料 金属 微载体 （2）系统： 微载体培养系统 多孔载体培养系统 中空纤维培养系统 第六十五页，共98页 微载体培养法(microcarrier culture) 载体：DEAE-交联葡聚糖微粒、DEAE-纤维素、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、无机玻璃基质微载体等。 微载体培养系统培养细胞步骤： 1、选择合适的微载体类型——获得最大量的细胞，以微载体能全部悬浮在培养液内为最好。 2、浸泡水化及消毒 用无Ca2+、Mg2+离子的磷酸缓冲液浸泡3h以上。 3、接种（根据细胞类型决定接种浓度） 4、培养观察与细胞计数 5、消化 6、分离细胞或传代培养 第六十六页，共98页 多孔载体培养(porosity carrier c