动物细胞和肿瘤细胞的培养.pptVIP

第一页，共22页 肝细胞的培养 肝实质由大量肝细胞和少量间质组成，人胎儿、成人和动物的肝脏皆可用于培养；肝脏具有取材方便和易于生长的优点，能获得典型上皮细胞培养。肝细胞形态规整，有多种功能并具有代谢活化致癌物的能力，适于做多种研究。 第二页，共22页 实验步骤： 1.把肝组织切成2-4立方毫米的小块，用不含钙镁的BSS 液洗两次； 2.移入1:1 的0.1％胰蛋白酶和0.1％胶原酶(都用无钙镁BSS 配制) 中，4℃冷消化10 -12 小时后，通过250 微米和64 微米尼龙网或不锈钢纱网滤过(用纱布滤过亦可)； 3.收集细胞、BSS 液洗1-2 次、计数、接种培养。 第三页，共22页 内皮细胞培养 内皮细胞易于从血管分离进行培养成单层细胞，对研究内皮细胞再生长、肿瘤促血管生长因子(TAF)等有很大应用价值。人内皮细胞培养可应用人脐带脐静脉、动物大动脉等，用灌流消化法获取细胞最为简便。 第四页，共22页 实验步骤： 1.新鲜脐带无菌剪取长10-15厘米； 2.入口处用线绳结扎，温PBS 液注入脐带的脐静脉中，洗除残血； 3.用从另端向脐静脉中徐徐注入最终浓度为0.1％的胶原酶，待末端出现液体后结扎之，消化3-10 分钟； 4.吸出含有内皮细胞的消化液，注入离心管中（可用温PBS 冲洗2-3 次获取尽量多细胞）； 5.离心去上清，加1640 培养液，制成细胞悬液，接种培养