动物细胞培养与表达制备药用蛋白.pptVIP

1.检查细胞形态及活力：倒置显微镜下观察培养瓶中原 代细胞，生长良好者轮廓不清晰，较透明；生长不良者 反而轮廓清晰，形态不规则，胞内有空泡、颗粒等。 四唑氮蓝法(MTT)法可以检测细胞活力：活细胞的线粒 体脱氢酶能将四唑盐还原成不溶于水的蓝紫色产物甲暨 （Formazan)并沉淀在细胞中。 2.培养液pH及污染检查：含血清的新鲜培养液呈桃红色， pH在7.2～7.4之间。CO2的积累使培养液pH下降， 当超出缓冲范围时，培养液变黄，需要3～4天更换 一次培养液。CO2培养箱能自动控制5%的CO2含量。 细菌污染时培养液变浑浊；支原体易透过滤器，污染 不易被发现。 （2）原代培养期检查 第三十一页，共79页 倒置显微镜：组成和普通显微镜 一样，只不过物镜与照明系统颠 倒，前者在载物台之下，后者在 载物台之上，用于观察培养的活 细胞，具有相差物镜。 第三十二页，共79页 3、动物细胞传代培养 传代培养（Passage culture/Subculturing）是指 将原代培养的细胞继续转接培养的过程，一般可传代50代左右。传代培养期间的细胞称为细胞系。 注意：每进行一次分离再培养称为传一代，即从 细胞接种培养到分离再培养期间的一段时间。在 细胞的一代中，细胞约能倍增3～6次。 第三十三页，共79页 传代培养方法 悬浮生长的细胞可以采用加入新鲜培养基后直接 吹打分散传代，或者采用自然沉