DNS法测定发酵液中葡萄糖浓度.docxVIP

DNS 法测定发酵液中葡萄糖浓度一、 实验原理 在碱性条件下，葡萄糖与 DNS（3，5-二硝基水杨酸）试剂反应，葡萄糖被氧化成糖酸及其他产物，DNS 被还原为棕红色的 3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，葡萄糖的量与棕红色物质颜色的深浅相关，利用分光光度计，在550nm 波长下测定吸光度值，查标准曲线并计算便可求出样品中葡萄糖的含量。 二、 材料与试剂 1．仪器：50ml 容量瓶，1000ml 容量瓶，500ml 烧杯，小烧杯，试管（带刻度 25ml 更好）10 根，棕色瓶 2.试剂： 1）葡萄糖 2）2mol/LNaOH 溶液 3） 酒石酸钾钠（C4H4O6KNa﹒4H2O，Mr=282.22） 4）结晶酚（C6H5OH,Mr=94.11） 5） 无水亚硫酸钠（Na2SO4,Mr=126.04） 6）蒸馏水 7）DNS 8）DNS 试剂配制：准确称取 DNS 6.3g 于 500ml 烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，加入2mol/LNaOH 溶液262ml，再加到 500ml 含有酒石酸钾钠 185g 的热水溶液中，再加结晶酚 5g 和无水亚硫酸钠 5g，搅拌溶解，冷却后移入 1000ml 容量瓶中用蒸馏水定容至，充分混匀。贮于棕色瓶中，室温放置一周后使用。 9）葡萄糖标准溶液配制：取适量葡萄糖装入称量瓶，再 85°C 烘箱烘至恒重，放入干燥器冷却。精确称取干燥后的葡萄糖 0.5