第七章 尿液分析仪器.ppt

编辑ppt （1）开展利用干化学法检测尿中WBC、RBC，进行显微镜检查的筛选。 （2）利用图象摄影系统摄制尿沉渣成分的静止图象，对尿沉渣成分进行自动分类、计算及储存等，形成尿沉渣自动分析系统。 （3）利用流式细胞术结合电阻抗原理检测尿中成分进行定量分析的全自动尿沉渣分析仪。 （4）除利用普通显微镜外，还可采用干涉、相差、偏振光、扫描及透射电镜等观察。 （5）现已采用尿沉渣活体染色及细胞化学等多染色法来识别各种细胞和管型。 （6）近年来应用单克隆抗体技术识别各种细胞成分。 二、尿沉渣分析仪分类 影像式尿沉渣分析仪 流式细胞术法尿沉渣分析仪 尿沉渣分析工作站 （一）流式细胞术法尿沉渣分析仪 以UF-100仪器为例了解尿沉渣分析原理。 1. 稀释、染色的标本通过鞘液池 2. 氩激光照射 3. 测定荧光、散射光和电阻抗 流式细胞术法尿沉渣分析仪结构 1. 稀释、染色的标本通过鞘液池 当一个尿液标本被稀释液稀释和染液染色后，它靠液压作用通过鞘液流动池，当反应样品从喷嘴出口进入鞘液流动室时，它被一种无粒子颗粒的鞘液包围，使每个细胞以单个纵列的形式通过流动池的中心(竖直)轴线。 UF-100分析原理 UF-100分析原理 在这里每个尿液细胞将被氩激光光束照射。每个细胞有不同程度的： 荧光强度(FL，fluorescent light)是从染色尿液细胞发出的荧光强度，主要反映细胞的定量特性，如细胞膜、核膜、线粒体、核酸等。 散射光强度(这种仪器测定的是前向角散射光Fsc,forward scattere light ,它成比例的反映细胞的大小） 电阻抗的大小（电阻抗电信号主要与细胞的体积成正比）。 2. 氩激光照射 仪器正是将这种荧光、散射光和电阻抗的信号转变成电信号，分析这些电信号，才能使得每个尿液标本产生出直方图和散射图，然后分析这些图形，即可区别出每个细胞并得出每个细胞的形态。 3. 测定荧光、散射光和电阻抗 UF-100分析原理 （二） 仪器结构 流式细胞术尿沉渣分析仪包括： 光学检测系统 液压系统 电阻抗检测系统 电子系统 光学系统由氩激光（波长488nm）、激光反射系统、流动池、前向光采集、前向光检测器组成。 1. 光学检测系统： 激光作为光源用于流式细胞分析系统，它被双色反射镜反射，然后被聚光器收集形成射束点，而聚集于流动池的中央。样品流到流动池，每个细胞被激光光束照射，产生前向散射光和前向荧光的光信号。散射光信号被光电二极管转变为电信号，被输送到微处理器。 根据光散射定律，在分析尿标本时，由于细胞的种类不同和分布不均，光的反射和散射主要取决于细胞表面，因此散射光的强度主要取决于细胞的大小，所以仪器可以从散射光的强度得出测定细胞大小的资料。 荧光通过滤光片滤过一定波长的荧光后，输送到光电倍增管，将光信号放大再转变成电信号，然后输送到微处理器，得出细胞的定量特性。 UF-100尿沉渣分析仪使用两种荧光染料： 一种为菲啶染料，主要染细胞的核酸成分（DNA），在480nm光波激发时，产生610nm的橙黄色光波，用于区别有核的细胞和无核的细胞（如RBC与WBC，病理管型和透明管型）； 另一种为羧花氰染料，它穿透能力强，与细胞质膜（细胞膜、核膜和线粒体）的脂层成分发生反应结合，在460nm 的光波激发时产生505nm的绿色光波，主要用于区别细胞的大小（如上皮细胞和白细胞的区别）。 这两种染料具有下列特性： 反应快速： 背景荧光低： 从细胞发生的荧光与染料和细胞的结合程度成比例。 反应池染色标本随着真空作用吸入到鞘液流动池。为了使尿液细胞进入流动池不凝固成团。而使单细胞流通过加压的鞘液输送到流动池，使染色的样品通过流动池的中央，鞘液形成一股液涡流，使尿液细胞排成单个纵队通过鞘液中心。 2. 液压（鞘液流动）系统 电阻抗测定系统包括测定细胞体积的电阻抗系统和测定尿液导电率的传导系统。 电阻抗测定的方法：与血细胞分析义的电阻抗原理相同。 部分标本含有某些结晶，影响电阻抗测定的敏感性，为了保证尿液标本传导性稳定，可以在稀释液中使用含EDTA盐化合物或加热使结晶溶解。 3. 电阻抗检测系统 从样品细胞中得到的前向散射光很强，不需要极敏感光检测器，光电二极管能够将光信号转变成电信号。 但从样品细胞中得到的前向荧光很弱，因此需要使用极敏感的光电倍增管。这种光电倍增管能够吸收在光电表面光子的能量，并使用金属光电效应发出光电子。 4. 电子系统 发出的光电子能够被外加电压促进，导致许多继发电子放大。这种