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. . Tubulin porcine brain 的生物学意义及应用 Tubulin porcine brain ，T240-DX ——微管蛋白〔猪脑， 纯度99% 〕采用 Shelanski 等人的方法从猪脑中纯化出微管蛋白，并用阳离子交换层析进一步纯化到 99% 以上的纯度。白色冻干粉供给。 一、 Tubulin porcine brain 的用途 主要表现在五个方面： 抗微管蛋白配体的 IC50 和 EC50 测定； 微管结合研究； 微管蛋白单体结合研究； 4.HDAC6 研究； 5. 微管激活的运动蛋白 atp 酶分析。 二、 Tubulin porcine brain 的材料组成 采用 Shelanski 等人的方法从猪脑中纯化出微管蛋白， 并用阳离子交换层析进一步纯化到 99% 以上的纯度。白色冻干粉供给。 该产品具有完全的聚合活性，采用专利技术进行冻干以提高稳定性和使用寿命。 T240 在 4°C 枯燥条件下稳定 1 年。如果您的工程需要相同批次的微管蛋白以获得一致的结果，强烈建议您批量购置该产品，以节 省时间和金钱。本品可替代我们的高纯度牛微管蛋白产品〔 Cat 。#TL238 、T238 和 T237 〕，并以相同的方式工作。 三、 Tubulin porcine brain 的纯度 通过 SDS凝胶上的蛋白质扫描密度测定。样品纯度 99% 。 四、 Tubulin porcine brain 的生物活性 微管蛋白的一个单位定义为 5.0 mg 纯化蛋白〔由精密红色高级蛋白分析试剂 cat 测定〕。#ADV02 〕。通过微管蛋白聚合试验评估 T240 的生物活性。微管蛋白聚合成微管的能力可以通过观察 340nm 处微管蛋白溶液的光密度增加来观察。当使用分光光度计路径长度为 0.8 cm 〔1/2 面积 96 孔板中的样品体积为180 μ l 〕时，一般微管蛋白缓冲液中的 5 mg/ml 微管蛋白溶液加上 5% 甘油和 1 mM GTP ，应在 30 分钟内获得 0.75-1.10 的 OD340 nm 读数。 需要注意的是， 微管蛋白减去甘油在 G-PEM 缓冲液中不会聚合， 直到微管蛋白浓度非常高 〔10 mg/ml 〕。即使在这些浓度下，聚合也相对缓慢。在低浓度微管蛋白 - 甘油的情况下，可通过添加聚合促进化合物〔例 如甘油、紫杉醇或二甲基亚砜〕实现高效聚合。 五、关于微管蛋白的两个问题 Q1 ：储存微管蛋白以确保最大的稳定性和活性的正确方法是什么？ A：微管蛋白冻干产品的建议储存条件为 4 °C，并添加枯燥剂，以保持湿度小于 10% 的湿度。在这些条件 下，蛋白质可以稳定 6 个月。冻干蛋白质也可以在 -70 °C 下枯燥保存，在那里它可以稳定 6 个月。但是，在-70 °C 时，管盖上的橡胶密封件可能会破裂并进入湿气。因此，我们建议在 4 °C 下储存。如果在 -70 °C下储存，如果使用这种储存条件，那么必须在冻干蛋白质中参加枯燥剂。按照指示重组蛋白质后，应将 G-PEM 缓冲液中的浓缩蛋白质等份，在液氮中快速冷冻，并在 -70 °C 下储存〔稳定 6 个月〕。注：在液氮中快速冷冻微管蛋白是非常重要的，因为其他冷冻方法会导致活性显著降低。在室温水浴中快速解冻 1 分 钟。防止反复冻融循环。 Q2 ：为什么细胞骨架推荐使用普通微管蛋白缓冲液和 GTP 来恢复微管蛋白？ A：为了维持微管蛋白和微管蛋白的构象，我们推荐使用 GTP+tubulin 单体。对于再悬浮，我们建议使用 普通微管蛋白缓冲液〔 Cat 。#BST01-001 〕，包括 80 mM 管道， 2 mM MgCl2 ，1 mM EGTA ，pH 7.0 ， 补充 1 mM GTP 〔Cat 。#BST06-001 〕。微管蛋白需要 GTP 和镁离子来维持适当的稳定性和构象，即使是 单体状态。聚合过程中还需要 GTP，因为它在微管蛋白聚合过程中的水解是发生聚合所必需的。 EGTA 是钙的螯合剂，是微管蛋白聚合的有效抑制剂。甘油通常被添加到 5-10% 的最终浓度，以增强聚合；然而， 甘油不是维持生物活性微管蛋白所必需的，在重组和储存微管蛋白时也不需要包含甘油。在对重组微管蛋 白进行分批储存时， 必须在浓度大于 6 mg/ml 的液氮中对微管蛋白进行等分和快速冷冻， 以保持微管蛋白的生物活性。然后，应将等分试样储存在 -70 °C 下。解冻等分试样时，应在室温水浴中快速解冻，并将其 放在冰上，直到试验使用之前。