放射免疫技术.ppt

;第十九章 放射免疫技术;;目　录 ;放射免疫技术是将放射性核素高敏感的示踪特点和抗原抗体反应的高特异性特点相结合的一种体外测定超微量物质的新技术。 其基本模式是应用放射性核素标记抗原或抗体，通过免疫反应进行定量测定。 具有灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便且易于标准化等优点，在医学检验中得到了广泛应用。 放射免疫技术根据其方法学原理的不同主要有两种类型：RIA和IRMA。 ;第一节 放射性核素和放射性标记物的制备 ;一、放射性核素的基本知识 ;125I的优点 ;放射性核素放射活性的检测;二、放射性核素标记抗原抗体方法 ;125I-;;（二）间接标记法;三、放射标记物的纯化与鉴定 ;比放射活性 高比放射性 高纯度 完整免疫活性 ;计算法 自身置换法 ;比放射性－计算法;比放射性－自身置换法; 自身置换曲线 ;自身置换法测定标记化合物的比放射活性，只适用于RIA的标记抗原。使用时应注意： ①标记物与未标记物对抗体（受体）的亲和力 应相同； ②非特异性结合应较小，且计算时应扣除； ③制备标准曲线与自身置换曲线时，操作步骤 应相同，特别是B与F分离的条件要一致。;第二节 放射免疫分析 ;一、检测原理 ;Ab限量，Ag*定量, Ag*和Ag的量大于 Ab结合位点，二者 通过竞争方式与Ab 结合；随着Ag增加，Ag*与Ab结合形成Ag*Ab复合物的放 射量降低,二者变化 成函数关系。 ;(标准Ag/样品Ag);三、关键技术 ;Ag*;二抗体沉淀法 ;晶体闪烁计数器 包括了NaI闪烁晶 体、光电倍增管 以及计数器 测量的放射性信 号是仪器输出的 电脉冲数：每分 钟计数(cpm) ;?RIA由于具有敏感度高、特异性强、精密度高、重复性好、用血量少、可测定小分子量和大分子量物质等优点，在医学检验中应用极为广泛，常用于各种激素和药物等的测定。 ?但由于放射性核素的放射性对人体会产生一定的危害性，且其废物的储存和销毁会对环境造成污染，因此操作时必须加以注意。;第三节 免疫放射分析;一、检测原理 ;二、方法与类型 ;（二）双位点 IRMA;三、关键技术 ;Ab*;固相吸附分离技术 ;晶体闪烁计数器 包括了NaI闪烁晶 体、光??倍增管 以及计数器 测量的放射性信 号是仪器输出的 电脉冲数：每分 钟计数(cpm) ;?IRMA的优点 ?效率高、操作简便 ?灵敏度高 ?特异型强 ?稳定性好;小 结;