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质粒扩增、提取、转化和转染等操作程序 2 一、感受态细菌制备（ CaCl 法） 1. 从 LB 平板上挑取新活化的大肠杆菌单菌落，接种于 5ml 不加 Amp 的 LB 培 养基中， 37℃振荡培养过夜（ 200r/min ，至 OD=1.5 左右）。 2. 取 0.5ml 上述振荡过夜的菌液， 转入含 50ml 的 LB 的三角烧瓶 （1%）中，37℃ 条件下振荡培养 2~2.5 小时左右 （200r/min ），使 OD600 达到 0.2~0.4 左右 （100μl 测 600nm 时 OD 值）。 3. 将培养液 50ml 分装到 4 个 10ml 的离心管中，每管 10ml，冰上放置 10min， 4. 4℃条件下， 4000r/min 离心 10 分钟，弃上清。将离心管倒扣在吸水纸上，尽 量倒尽管中的培养基。 5. 每管加入预冷的 0.1mol/l CaCl2 溶液 2ml ，用枪轻轻吹打，重悬沉淀。转移到 一个离心管中，共 8ml 。 6. 冰上放置 10min 后， 4℃条件下， 4