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(完整版)选修一课堂填空大肠杆菌和尿素答案 (完整版)选修一课堂填空大肠杆菌和尿素答案 PAGE / NUMPAGES (完整版)选修一课堂填空大肠杆菌和尿素答案 选修一课堂默写（ 1） 班级 姓名 实验 1 大肠杆菌的培养和分离 1．培养基的配制 （ 1） LB 培养基是通用的细菌培养基，其中包含水、 NaCl 、 蛋白胨 和 酵母提取液 （如果配制的是固体培养基，还需要加入 琼脂 ）。 （ 2）培养细菌的培养基中加入一定量 NaCl 的作用是 维持渗透压 。 （ 3）在制备培养基时，还需调节培养基的 pH，细菌通常喜欢 中性偏碱性 的环境，调节 pH 应该在 培养基灭菌之 前 （填“前”或“后” ）。 （ 4）培养基配置完成后，需转移分装到三角瓶、试管中，为了避免发生 污染 ，三角瓶口、试管口不能 沾有培养基，因此，分装时必须用 三角漏斗（玻璃漏斗） 。分装完成后，三角瓶口和试管口需要加棉塞， 制作棉塞所需的棉花不能用脱脂棉，因为脱脂棉 易吸水，吸水后容易引起污染 。如果有条件，可以用 __ 封口膜（橡胶塞、塑料盖） 代替棉塞。 （ 4）常见的灭菌方法还有 高压蒸汽 灭菌法和 灼烧 灭菌法等三角瓶、培养皿和试管等器皿的灭菌要在 121℃（ 1kg/cm 2 压力）下灭菌 15 分钟，这种灭菌方法称为 高压蒸汽 灭菌法。 （ 5）制备培养细菌用的空白试管斜面： LB 液体培养基配好后，加入 琼脂 并加热使之 融化 ，在未凝固 时，通过 三角漏斗（玻璃漏斗） 加入试管（ 15mmX150mm）中，每支试管 2 ml 。试管口加 棉塞 ，并将 试管捆在一起，上端加盖一张 牛皮纸（报纸） 纸，灭菌后将试管 斜靠在平放的铅笔上 ， 冷却 后，固 体培养基即成为斜面。 2．大肠杆菌的扩大培养 将 接种环 在酒精灯火焰上烧红后伸入保存有大肠杆菌的试管斜面，待其 冷却 后再蘸取大肠杆菌，将其放 入三角瓶的 液体 培养基中，然后将三角瓶用封口膜密封，放到 37℃、每分钟 200 转的 摇床 上 振荡 12 小时。 3．大肠杆菌的分离 （ 1） 单菌落 的分离是消除污染杂菌的通用方法，也是筛选高表达量菌株的最简便方法之一。分离细菌 的方法主要有 划线 分离法和 涂布 分离法。前者通常使用的工具是 接种环 ，后者通常使用的工具是 玻璃刮刀。 其中操作方法较简单的是 划线 分离法，较容易得到单菌落的是 涂布 分离法。如果要统计活 细菌的数目，宜采用 涂布 分离法。 （ 2）划线分离法：将 接种环 烧红并冷却后蘸取大肠杆菌菌液，然后在培养皿的 固体 培养基上连续划 线。完成后盖上盖子，然后将培养皿 倒置 ，在 37℃的 恒温培养箱 中培养 12～ 24 小时。由于在划线过 1 程中 接种环 上的菌液逐渐 稀释， 因此划线最后部分细菌间的距离逐渐 加大 。经培养后可看到在划线 的末端出现不连续的 单菌落 ，这表明细菌已被分离。 （ 3）涂布分离法：先将大肠杆菌菌液 稀释 ，然后取 0.1 ml 稀释度不同的菌液，加到培养皿的 固体 培 养基上。再将保存在 70% 酒精中的 玻璃刮刀 放在酒精灯火焰上，待 玻璃刮刀 上的火焰熄灭后，用其将 培养皿中的菌液涂布在培养基平面上。 完成后盖上盖子， 然后将培养皿 倒置 ，在 37℃的 恒温培养箱 中 培养 12～ 24 小时，最后可得到相互分开的 单菌落 ，这表明细菌已被分离。在适当的稀释度下，可培养得 到相互分开的菌落，通常以每个培养皿中有 20 个以内的 单菌落 最为适宜。 4．大肠杆菌的保存 在 无菌 条件下，将大肠杆菌的单菌落用 接种环 取出，再用划线法接种在试管中的 斜面培养基 上，37℃ 培养 24 小时后，置于 4℃的 冰箱 中保存。 实验 2 分离以尿素为氮源的微生物 1．尿素又称 脲 ，是 蛋白质 降解的产物。土壤中有一些细菌含有 脲酶 ，它们可以将尿素降解为 氨 ， 从而为其生长提供 氮源 。在脲酶作用下，尿素分解的化学方程式是： 书25页 2．分离以尿素为氮源的微生物所用的培养基中含有水、 NaCl、 K2HPO4、 尿素 、 葡萄糖 、琼脂糖和 酚红等，其中酚红作为 指示剂 ，琼脂糖作为 凝固剂 ，选用琼脂糖而不选用琼脂的原因是 琼脂中含有一定 量的含氮化合物，不利于以尿素为氮源的微生物的筛选 。尿素培养基灭菌时，为防止尿素 分解 ，可将尿 素溶液通过 G6 玻璃砂漏斗 过滤，使其无菌。 该设备使用前需经过 高压蒸汽 灭菌，使用后需用 1mol/L 的 盐酸 浸泡，并抽滤去酸，再用 蒸馏水 清洗至洗出液呈中性，干燥后保存。培养基的其余成分配 制好后用 高压蒸汽 灭菌法灭菌，待冷却至 60 ℃时，加入无菌的尿素溶液，混合均匀后待用。同时