高效液相色谱仪.ppt

高 效 液 相 色 谱;一、高效液相色谱仪;Waters 2487;;20世纪70年代后发展迅速，它在技术上采用高压泵，高效固定相和高灵敏度的检测器，实现了分析速度快，分离效率高和操作自动化。 特点：高压、高效、高速 分离对象：适用高沸点、热不稳定有机及生化试样分离分析 （与GC区分） ;三、流程及主要部件;2. 主要部件; 高压泵作用：输送流动相。 也即是贮液瓶中的有机溶剂或缓冲溶液靠高压泵送入色谱柱。由于色谱柱的阻力很大，高压泵必须克服阻力以恒定流速输送流动相，这是保证色谱仪精确度的前提??? 常用的压力范围：150～350×105 Pa 　　欧美等国家习惯使用psi作单位 　　 PSI英文全称为Pounds per square inch。 定义为英镑/平方英寸， 　它们之间的换算关系为： 1bar≈14.5psi =105Pa ， 145psi = 1Mpa 　　1psi = 6.895kPa=0.06895bar; 高压泵应具有以下性能 流量稳定，精度在1%左右 输出压力高，通常20~30MPa，最高50 MPa 流量范围宽，一般在0.01~10mL/min范围内 能抗溶剂腐蚀 压力波动小、更换溶剂方便、容易清洗、具梯度洗脱 操作方便、容易维修  ; 根据泵的操作原理不同，分为恒压泵和恒流泵 气动放大泵（恒压泵） 往复泵（恒流泵）是目前液相色谱使用最普遍的一种 高 压泵。其中又分单头往复泵和双头往复泵。 往复泵的优点是泵头内腔体积小，容易洗净，故更换 溶剂十分方便，尤其适合做色谱条件试验时使用。 ;(2) 进样装置 手动进样阀通常使用耐高压的六通阀 (美国Rheodyne 公司专利技术)， 其结构如图所示：;图中a为进样阀处于“装样load”位置的情况，此时流动相直接进入色谱柱， 样品注入口与样品环连接，用微量进样针将一定体积的样品溶液从样品 注入口注入，装于样品管内。当将扳手扳至“进样inject”位时，进样阀的 流路发生了改变，流动相通过样品管，将注入的样品带入色谱柱进行分析。 六通进样阀具有使用方便，进样量准确等优点。 ; 样品环(Loop) 规格：有10μL、20μL、50μL等不同容积， 可以根据需要选配。 作用：用来贮液，也用来测量样品溶液的体积。 将样品环装满后进样，进样量即为样品环的容积，此种进样方式称为“满环进样”或“定量环进样”。 用定量环进样精密度好，在使用外标法时，应使用此种操作方式。 ;自动进样器; ;色谱柱（Column） 结构：柱管多用不锈钢制成，色谱柱两端的柱接头内装有 筛板，目的是防止填料漏出。 填料：多以硅胶为基质，适用PH 2～8 粒度多为0.2～20 μm(以5～10μm居多) 。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 规格：常规分析柱(常量柱) 内径2～5mm(常用4.6mm， 3.9mm)，柱长10～30cm (15cm，25cm居多） 制备柱 （21.2mm、30mm、50mm） 半制备柱（〉5mm，7.8mm、9.8mm、10mm） ; C18柱（C8柱）;; 正相柱：固定相通常为硅胶以及其他具有极性官能团，如胺基(NH2)和 氰基(CN)的键合相填料。由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基 团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即 极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱；正相色谱使用的流动相极性相 对比固定相低，如正已烷、氯仿 、二氯甲烷等。反相柱：固定相通常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的 键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲 醇，乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被 冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。常用的反向填 料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。;; (4) 液相色谱检测器 ;工作原理：基于朗伯-比尔定律。 即用特定波长的紫外光照射样品池，通过检测透光率的变化来测定样品浓度的检测器。 它具有波长固定，波长可变和光电二极管阵列三种类型。 ; 特点：选择性检测器， 灵敏度较高（10-9g）， 噪音低。